Chapitre II : Matériel et méthodes
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divisant en plusieurs plans en formant des amas irréguliers. Ils produisent une catalase. Leur
paroi est principalement constituée de peptidoglycane. Staphylocoques à coagulase positive
(SCP), notamment Staphylococcus aureus, principal producteur d’entérotoxines pathogènes
pour l’homme possède une enzyme, la coagulase qui permet de les identifier.
Mode opératoire
On ensemence en surface avec 0,1ml d’une dilution dans une boit de pétrie contenant déjà la
gélose Baird Parker ; le jaune d'œuf et tellurite de Potassium, on étale sur toute la surface à
l'aide d'un râteau puis incube à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement
Les colonies de staphylococcus auréus donnent des colonies noires (réduction du tellurite en
tellure) avec un halo claire du à la protéolyse des protéines du jaune d'œuf, et éventuellement,
un liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras produits par la lecithinase qui hydrolyse
la lécithine du jaune d'œuf). Leur taille est de 0,5 à 2mm, avec un aspect brillant.
Test de la coagulase
On prélève les colonies suspectées d'être celles des staphylococcus aureus qu'on ensemence
dans un tube contenant le milieu cœur cervelle, incubation à 37°C/24h.
Mettre dans une cloche de Durham 0,5 ml du milieu d'enrichissement + 0,5ml de plasma de
lapin, incuber à 37°C pendant 5 à 24h. La coagulation du plasma confirme que c'est le germe
staphylococcus aureus.
II.4.6. Recherche et dénombrement des anaérobies sulfitoréducteurs (ASR)
Ce sont des formes résistantes d'organismes anaérobies en raison de leur caractère sporulé,
dont les plus fréquentes et les plus faciles à mettre en évidence sont les Clostridies. Elles sont
normalement présentes dans les matières fécales mais en plus petite quantité que E.Coli. Elles
sont également présentes dans le sol, les rivières. Parmi les Clostridium sulfito-réducteurs, C.
perfringens et C.botulinum qui sont très souvent à l’origine de toxi-infections d’origine
alimentaire sont considérés comme germe-teste pour l’appréciation de la qualité hygiénique
des denrées alimentaires.
Mode opératoire
L’ensemencement est fait en tube, mettre dans un tube a essai 20ml de chaque dilution plus
témoin, chauffer au bain marie à 80°C/10mn, puis refroidir rapidement, à partir de ces tubes,
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divisant en plusieurs plans en formant des amas irréguliers. Ils produisent une catalase. Leur
paroi est principalement constituée de peptidoglycane. Staphylocoques à coagulase positive
(SCP), notamment Staphylococcus aureus, principal producteur d’entérotoxines pathogènes
pour l’homme possède une enzyme, la coagulase qui permet de les identifier.
Mode opératoire
On ensemence en surface avec 0,1ml d’une dilution dans une boit de pétrie contenant déjà la
gélose Baird Parker ; le jaune d'œuf et tellurite de Potassium, on étale sur toute la surface à
l'aide d'un râteau puis incube à 37°C pendant 48h.
Lecture et dénombrement
Les colonies de staphylococcus auréus donnent des colonies noires (réduction du tellurite en
tellure) avec un halo claire du à la protéolyse des protéines du jaune d'œuf, et éventuellement,
un liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras produits par la lecithinase qui hydrolyse
la lécithine du jaune d'œuf). Leur taille est de 0,5 à 2mm, avec un aspect brillant.
Test de la coagulase
On prélève les colonies suspectées d'être celles des staphylococcus aureus qu'on ensemence
dans un tube contenant le milieu cœur cervelle, incubation à 37°C/24h.
Mettre dans une cloche de Durham 0,5 ml du milieu d'enrichissement + 0,5ml de plasma de
lapin, incuber à 37°C pendant 5 à 24h. La coagulation du plasma confirme que c'est le germe
staphylococcus aureus.
II.4.6. Recherche et dénombrement des anaérobies sulfitoréducteurs (ASR)
Ce sont des formes résistantes d'organismes anaérobies en raison de leur caractère sporulé,
dont les plus fréquentes et les plus faciles à mettre en évidence sont les Clostridies. Elles sont
normalement présentes dans les matières fécales mais en plus petite quantité que E.Coli. Elles
sont également présentes dans le sol, les rivières. Parmi les Clostridium sulfito-réducteurs, C.
perfringens et C.botulinum qui sont très souvent à l’origine de toxi-infections d’origine
alimentaire sont considérés comme germe-teste pour l’appréciation de la qualité hygiénique
des denrées alimentaires.
Mode opératoire
L’ensemencement est fait en tube, mettre dans un tube a essai 20ml de chaque dilution plus
témoin, chauffer au bain marie à 80°C/10mn, puis refroidir rapidement, à partir de ces tubes,