Chapitre 02
méthodologie
51
l’échantillon (Annexe 04). Plus IC 50 est petites, plus l’activité anti-oxydante dans la substance
étudiée est plus importante. (Sachez- Moreno et al. 1998).
IV. 3.3.2. Activité antimicrobienne:
L’activité antimicrobienne correspond à l'activité d’une molécule ou composé présent au
sein d’un échantillon donné qui à très faible concentration, inhibe le développement d’un
germe pathogène.
Face à un antibactérien donné, la sensibilité d’une bactérie peut être très différente selon la
souche d’appartenance(Nicolas et Daniel, 1998).
a. Méthodes de détermination de l’activité antimicrobienne :
La méthode choisie pour l’essai antibactérien et antifongique est celle par diffusion en
milieu solide (Bergogne-Bérézin etDellamonia 1999; Paris etMoyse 1976) La diffusion en
disque est facile à mettre en œuvre, reproductible et ne nécessite pas d’équipement couteux.
b. Principe :
L’effet du produit antibactérien sur la cible est apprécié par la mesure d’une zone
d’inhibition, et en fonction du diamètre d’inhibition la souche du microorganisme sera
qualifiée de sensible, d’intermédiaire ou de résistante.
c. Mode opératoire :
Tout d’abord, les souches microbiennes : Escherichia coli (E. coli, ATCC 10536), Bacillus
subtilis (BS, ATCC 6633), Candida albicans (M3), Mucor ramannianus (MR, NRRL 1829)
ont été repiquées et incubés différemment sur milieu GN (gélose nutritif) à 37°C pendant 24h
pour les bactéries et la levure et sur milieu DPA pour le champignon à 25°C pendant 48h.
Préparation de l’inoculum :
Après incubation, quelques colonies de la culture jeune de micro-organismes ont été
prélevées et émulsionnée dans un tube contenant de l’eau physiologique. Après agitation la
turbidité de la suspension bactérienne est ajusté à la turbidité de 0.5 Mc Far land à la longueur
d’onde 600nm.
Le 0.5 Mc Far land est préparé comme suit :
0.05 ml (Bacl2.2H2O) à 1.175%
9.95 ml H2SO4 à 1%.
méthodologie
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l’échantillon (Annexe 04). Plus IC 50 est petites, plus l’activité anti-oxydante dans la substance
étudiée est plus importante. (Sachez- Moreno et al. 1998).
IV. 3.3.2. Activité antimicrobienne:
L’activité antimicrobienne correspond à l'activité d’une molécule ou composé présent au
sein d’un échantillon donné qui à très faible concentration, inhibe le développement d’un
germe pathogène.
Face à un antibactérien donné, la sensibilité d’une bactérie peut être très différente selon la
souche d’appartenance(Nicolas et Daniel, 1998).
a. Méthodes de détermination de l’activité antimicrobienne :
La méthode choisie pour l’essai antibactérien et antifongique est celle par diffusion en
milieu solide (Bergogne-Bérézin etDellamonia 1999; Paris etMoyse 1976) La diffusion en
disque est facile à mettre en œuvre, reproductible et ne nécessite pas d’équipement couteux.
b. Principe :
L’effet du produit antibactérien sur la cible est apprécié par la mesure d’une zone
d’inhibition, et en fonction du diamètre d’inhibition la souche du microorganisme sera
qualifiée de sensible, d’intermédiaire ou de résistante.
c. Mode opératoire :
Tout d’abord, les souches microbiennes : Escherichia coli (E. coli, ATCC 10536), Bacillus
subtilis (BS, ATCC 6633), Candida albicans (M3), Mucor ramannianus (MR, NRRL 1829)
ont été repiquées et incubés différemment sur milieu GN (gélose nutritif) à 37°C pendant 24h
pour les bactéries et la levure et sur milieu DPA pour le champignon à 25°C pendant 48h.
Préparation de l’inoculum :
Après incubation, quelques colonies de la culture jeune de micro-organismes ont été
prélevées et émulsionnée dans un tube contenant de l’eau physiologique. Après agitation la
turbidité de la suspension bactérienne est ajusté à la turbidité de 0.5 Mc Far land à la longueur
d’onde 600nm.
Le 0.5 Mc Far land est préparé comme suit :
0.05 ml (Bacl2.2H2O) à 1.175%
9.95 ml H2SO4 à 1%.