MATERIEL ET METHODES
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Des puits de 4 mm de diamètre ont été réalisés à l’aide d’une pipette Pasteur stérile, ensuite,
chaque puit a été rempli par 100 µl de suspension bactérienne des souches inhibitrices
(figure 6). Les boîtes sont ensuite incubées à 37°C pendant 24h. L’inhibition est révélée par
la présence de zones d'inhibition (halo) autour des puits (BAREFOOT &
KLAENHAMMER, 1983).
Figure 5: Schéma représentant la méthode de détection de l'antagonisme bactérien par puits
(adaptée d’après BAREFOOT et KLAENHAMMER, 1983).
II.2.4 Test de production de biofilm
Une culture bactérienne jeune de 18h est ajustée à une densité optique comprise entre 0.56 –
0.64 à une longueur d’onde de 540 nm. Un volume de 250µl de chaque suspension est incubé
sur les plaques de 96 puits stériles pendant 6h à 37°C. Après incubation, chaque puit est
d’abord lavé avec 25µl de cristal violet à 1% qu’on laisse reposer pendant 15 minutes. Les
puits sont ensuite lavés 3 fois avec 200 µl de PBS stérile, puis deux fois avec 200µl d’éthyle
alcool. Le contenu de l’inoculum est introduit dans un tube à essai contenant un volume de
1.2 ml d’alcool. Après agitation, la DO est mesurée à une longueur d’onde de 540 nm. Les
souches bactériennes sont qualifiées de fortes productrices de biofilm si la DO est supérieure
à 0,500, de productrices moyenne si la DO est comprise entre 0.500 et 0.100 et de faibles
productrices si la DO est inférieure à 0.100 (MALDONADO et al., 2007). L’expérience a été
faite en triplicata.