MATERIEL ET METHODES
27
Mode opératoire
Préparation de la galerie
Réunir fond et couvercle d’une boîte d’incubation et répartir environ 5 ml d’eau
distillée dans les microtubes afin de créer une atmosphère humide, puis, déposer
stérilement la galerie dans la boîte d’incubation.
A l’aide d’une pipette la suspension bactérienne est introduite dans les tubes et cupules
des tests: CIT, VP, GEL Pour les autres tests, seuls les tubes sont remplis
Les tests ADH, LDC, ODC, H₂S, URE, nécessitent une anaérobiose en remplissant leur
cupule avec l’huile de vaseline.
Après avoir préparé la galerie API20E, fermer la boite d’incubation et incuber à 37±
2°C (MURRAY et al., 1999).
Lecture
Noter sur la fiche les résultats de toutes les réactions spontanées.
Révéler les tests nécessitant l’ajout de réactifs:
Test VP: l’ajout d’une goutte de réactif VP1 et VP2. Une couleur rose franche apparait
dans les 10 minutes, indique une réaction positive
Test TDA: l’ajout d’une goutte de réactif TDA. Une couleur marron foncé indique une
réaction positive.
Test IND: l’ajout d’une goutte de réactif Kovacs, l’apparition instantanée d’un anneau
rouge indique une réaction positive.
La lecture des réactions se fait selon le profil numérique à l’aide du catalogue
analytique API 20E (CASTILLO et BRÜCKNER, 1984).
II.2.3 Le test du pouvoir antagoniste par la méthode des puits
La méthode des puits repose sur la diffusion d’agents inhibiteurs dans des puits creusés dans
une gélose contenant dans sa masse une souche indicatrice. Le milieu utilisé consiste en une
gélose Mueller Hinton (MH) coulée en boîte de Pétri. L’ensemencement se fait en trempant
un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne puis on le frotte sur la totalité de la
surface gélosée en stries serrées. Cette opération est répétée trois fois en tournant la boite de
60° à chaque fois. Les souches indicatrices utilisées sont : E.coli ECTC8, E.coli K12, Vibrio
fluvialis, Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa ; ces souches sont considérées
comme pathogènes chez les poissons d’intérêts aquacoles.
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Mode opératoire
Préparation de la galerie
Réunir fond et couvercle d’une boîte d’incubation et répartir environ 5 ml d’eau
distillée dans les microtubes afin de créer une atmosphère humide, puis, déposer
stérilement la galerie dans la boîte d’incubation.
A l’aide d’une pipette la suspension bactérienne est introduite dans les tubes et cupules
des tests: CIT, VP, GEL Pour les autres tests, seuls les tubes sont remplis
Les tests ADH, LDC, ODC, H₂S, URE, nécessitent une anaérobiose en remplissant leur
cupule avec l’huile de vaseline.
Après avoir préparé la galerie API20E, fermer la boite d’incubation et incuber à 37±
2°C (MURRAY et al., 1999).
Lecture
Noter sur la fiche les résultats de toutes les réactions spontanées.
Révéler les tests nécessitant l’ajout de réactifs:
Test VP: l’ajout d’une goutte de réactif VP1 et VP2. Une couleur rose franche apparait
dans les 10 minutes, indique une réaction positive
Test TDA: l’ajout d’une goutte de réactif TDA. Une couleur marron foncé indique une
réaction positive.
Test IND: l’ajout d’une goutte de réactif Kovacs, l’apparition instantanée d’un anneau
rouge indique une réaction positive.
La lecture des réactions se fait selon le profil numérique à l’aide du catalogue
analytique API 20E (CASTILLO et BRÜCKNER, 1984).
II.2.3 Le test du pouvoir antagoniste par la méthode des puits
La méthode des puits repose sur la diffusion d’agents inhibiteurs dans des puits creusés dans
une gélose contenant dans sa masse une souche indicatrice. Le milieu utilisé consiste en une
gélose Mueller Hinton (MH) coulée en boîte de Pétri. L’ensemencement se fait en trempant
un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne puis on le frotte sur la totalité de la
surface gélosée en stries serrées. Cette opération est répétée trois fois en tournant la boite de
60° à chaque fois. Les souches indicatrices utilisées sont : E.coli ECTC8, E.coli K12, Vibrio
fluvialis, Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa ; ces souches sont considérées
comme pathogènes chez les poissons d’intérêts aquacoles.