MATERIEL ET METHODES
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- On récupère la phase organique, et on procède à d’autre extraction de la phase
liquide, en versant 40 mL hexane - éthanol (v / v), deux à trois fois, à chaque fois la phase
organique obtenue est additionné a la précédente.
- On additionne 20 mL d’hexane a la phase organique, et on la filtre en présence du
sulfate de sodium (Na 2 SO 4 ) dans un ballon et on le place dans le rota-vapeur afin d’obtenir un
concentré de pigments caroténoïdes par évaporation de l’hexane.
2.4.2. Dosage par spectrophotométrie
- On dissous le concentré par 25 mL d’hexane.
Préparation de la courbe d’étalonnage.
- On dissout 0,036 g de bichromate de potassium dans 100 mL, chaque mL de la
solution correspond à 0,00266 mg de caroténoïdes totaux calculés comme béta- carotène.
La concentration sera donc 2,66 mg/L de caroténoïdes. A partir de cette concentration
on prépare plusieurs standards aux différentes concentrations : 1, 2, 5, 10, 15 mg/L (fig 8).
Figure 8: La courbe d’étalonnage
- On lit l’absorbance de différents standards et on trace la ligne A = f (C)
- On dilue l’échantillon jusqu’à 6 fois pour qu’ils soient encadrés par la gamme étalon.
- On lit l’absorbance de chaque échantillon trois fois, le solvant de référence est
l’hexane.
y = 0,027x - 0,0043
R² = 0,9992
-0,05
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0,45
0
5
10
15
20
densité
optique
Linéaire
(DO)
DO = f (C)