Partie II
Matériel et méthodes
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Afin de mieux caractériser le profil biochimique et morphologique des bactéries
recherchées, un test a été effectué, il s’agit de la coloration de Gram dont le protocole est
décrit ci-dessous :
- Protocole de la coloration de Gram :
Un frottis fixé à la chaleur et coloré pendant une minute avec une solution de violet
de gentiane, le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol,
et il y est maintenu pendant une minute.
Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant quelques secondes jusqu'à
élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec l’eau du robinet.
Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine, rincé
rapidement au robinet et séché.
Après ce traitement, les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram
positif apparaissent sous une couleur violette (SINGLETON et SAINSBURY, 1984)
- Le principe de la coloration :
Le principe de cette coloration est que le violet de gentiane se fixe sur des composants
cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez
les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l’alcool qui décolore
le cytoplasme et adopte la couleur rosâtre de la Fushine, alors que chez les bactéries a Gram
positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l’alcool et le cytoplasme demeure coloré
en violet (PELMONT, 1993).
- Test de catalase :
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) qui est produit
par certaines réactions cellulaire et est très toxique, donc c’est l’une des enzymes chargée
d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (PELMONT, 1993).
La réaction catalysée est la suivante :
2 H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O
Le test de la catalase consiste essentiellement à ajouter du peroxyde d’hydrogène à des
bactéries : la présence de catalase donne lieu à l’apparition de bulles d’oxygène (tableau 4).