Chapitre 3
Matériels et méthodes
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3.2.1.2. Réactifs
 Suspension carbonate de magnésium MgCO à 1%.
 Solvant d’extraction : acétone à 90 %.
3.2.1.3. Mode opératoire
a. Filtration et conservation
 Dès le retour au laboratoire on a fait la filtration de chaque échantillon et on ajoute
quelques gouttes de MgCO3 sur le filtre.
 Le filtre est plié en quatre et enrobé dans du papier aluminium préalablement étiqueté.
 Mettre les filtres dans le congélateur pour une analyse ultérieure.
b. Extraction à l’acétone
 Les tubes de 10 ml sont préalablement rincés avec de détergent, de l’eau de robinet et
de l’eau distillée, et sécher à l’étuve.
 Préparation d’une solution de l’acétone à 90% : dans une éprouvette de100 ml remplir
90 ml d’acétone pur et compléter à 100 ml par de l’eau distillée.
 Conditionner les tubes de dosage par l’acétone
 Mettre les filtres dans les tubes préalablement numérotés et ajouter 6 ml de l’acétone à
90%.
 Placer les tubes à l’obscurité dans un réfrigérateur, pour une période d’extraction de 12
heure.
 Allumer l’appareil et la lampe une heure avant les mesures.
 Après l’extraction, centrifuger à 3000 tours/min, pendant 2 minutes.
 mesurer l’intensité fluorescente (IF) des échantillons avant et après l’acidification par
HCL (0.1 N) d’un volume de 40µl pour corriger l’erreur
 La lecture de l’intensité fluorescente se fait aux longueurs d’ondes suivantes :
 Longueur d’émission = 660 nm.
 Longueur d’excitation = 540 nm.
3.2.1.4. Etalonnage
L’étalonnage est réalisé à l’aide d’une série de Cinque standards de concentration de : 2
µg/l, 5 µg/l, 10 µg/l, 20 µg/l et 40 µg/l, en plus d’un blanc d’acétone pour tracer une droite
d’étalonnage de la chlorophylle a.
Ces standards sont préparés à partir d’une solution mère de chlorophylle de 2 mg/l.
Les volumes à prélever de la solution mère pour la préparation de la gamme des standards sont
respectivement : 1 µl, 2,5 µl, 5 µl, 10 µl et 20µl à compléter ce volume à 10ml avec de l’acétone
90 %.