Matériel et méthodes
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germes ; Gram positif : Staphylococcus aureus et Streptocoques fécaux, et Gram négatif :
Escherichia coli.
5.1.1. Recherche des souches bactérienne
Dans le but d’effectuer l’activité antibactérienne de l’huile de poisson, il nous a fallu de
sélectionner trois germes bactériens. A savoir E. coli, Streptocoques fécaux et S. aureus qui
ont été isolés à partir d’un échantillon d’eau de mer.
Pour cela nous avons procéder à la recherche de ces germes par la méthode de filtration sur
membrane .Cette technique permet de détecter et quantifier les germes présent dans un
volume d’eau de mer qui y sont retenues sur un filtre dont les pores sont inferieurs à la taille
des bactéries (pore de 0.45µm), ensuite le filtre qui a retenu les bactéries est déposé sur un
milieu de culture approprié, où elles puisent les éléments nécessaires à croitre et se développer
(Tableau 5).
Tableau 5. Type de milieu, temps et durée d'incubation et résultats des trois germes
recherchés.
Germe
CF dont E.coli
Streptocoques fécaux
S.aureus
Milieu de culture
Gélose lactosé au Tergitol
7 et au TTC tergitol
Slantz e
Bartley
(test
présomptif)
BEA
(test de
confirmation)
Chapman
Incubation
44° C
24 à 48h
37° C
24 à 48h
37° C
24 à 48h
37°C
24 à 48h
Lecture
(aspect des
colonies
caractéristiques)
Jaune orange
Rouges
brique
Noires
entourées
d’un halo
noire +
noircissement
du milieu
Colonies jaune
(Mannitol +)
5.1.2. Isolement des souches bactérienne
Après l’incubation des boites, des tests de confirmation sur les colonies caractéristiques pour
chaque germe sont recommandés pour les identifier d’une façon convenable, à savoir la
coloration de Gram, le test de la catalase, la coagulase pour les S. aureus et le test de Mac
Kenzie pour E.coli. Pour avoir des colonies bien isolées (des germes déjà identifiées) on
entame l’étape de l’isolement par la méthode de l’ensemencement par stries (quadrants) sur
les milieux de cultures correspondants (Tableau 5).
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germes ; Gram positif : Staphylococcus aureus et Streptocoques fécaux, et Gram négatif :
Escherichia coli.
5.1.1. Recherche des souches bactérienne
Dans le but d’effectuer l’activité antibactérienne de l’huile de poisson, il nous a fallu de
sélectionner trois germes bactériens. A savoir E. coli, Streptocoques fécaux et S. aureus qui
ont été isolés à partir d’un échantillon d’eau de mer.
Pour cela nous avons procéder à la recherche de ces germes par la méthode de filtration sur
membrane .Cette technique permet de détecter et quantifier les germes présent dans un
volume d’eau de mer qui y sont retenues sur un filtre dont les pores sont inferieurs à la taille
des bactéries (pore de 0.45µm), ensuite le filtre qui a retenu les bactéries est déposé sur un
milieu de culture approprié, où elles puisent les éléments nécessaires à croitre et se développer
(Tableau 5).
Tableau 5. Type de milieu, temps et durée d'incubation et résultats des trois germes
recherchés.
Germe
CF dont E.coli
Streptocoques fécaux
S.aureus
Milieu de culture
Gélose lactosé au Tergitol
7 et au TTC tergitol
Slantz e
Bartley
(test
présomptif)
BEA
(test de
confirmation)
Chapman
Incubation
44° C
24 à 48h
37° C
24 à 48h
37° C
24 à 48h
37°C
24 à 48h
Lecture
(aspect des
colonies
caractéristiques)
Jaune orange
Rouges
brique
Noires
entourées
d’un halo
noire +
noircissement
du milieu
Colonies jaune
(Mannitol +)
5.1.2. Isolement des souches bactérienne
Après l’incubation des boites, des tests de confirmation sur les colonies caractéristiques pour
chaque germe sont recommandés pour les identifier d’une façon convenable, à savoir la
coloration de Gram, le test de la catalase, la coagulase pour les S. aureus et le test de Mac
Kenzie pour E.coli. Pour avoir des colonies bien isolées (des germes déjà identifiées) on
entame l’étape de l’isolement par la méthode de l’ensemencement par stries (quadrants) sur
les milieux de cultures correspondants (Tableau 5).