Annexe I
-66 Centrifuger 10 000 rmp pendant 1 minute
 Jeter le culot
 Centrifuger à vide pendant 5 minutes
 Transférer les membranes sur les eppendorf
 Eluer avec 50 µl de TEDs
 Laisser reposer 1 minute à température ambiante
 Centrifuger 10 000 rpm pendant 1 minute
Mode opératoire de la réaction de séquençage et purification des produits
 Réaction de séquençage
Dans chaque tube, ajouter :
3 µl de tampon
6µl d’ADN
6.3 µl d’eau distillée
1.5 µl de mix
3.2 µl d’amorce (sens ou revers)
V f = 20µl
Centrifuger pendant 10 secondes
Les tubes sont ensuite introduits dans l’amplification et le programme de séquençage est lancé
 Purification de l’ADN
Ajouter 30 µl de la solution d’injection et bien mélanger avec la pipette
Transférer tout le volume vers la plaque millipore.
Appliquer le vide pendant 5 minutes.
Ajouter 30 µl de la solution d’injection.
Appliquer le vide pendant 5 minutes.
Ajoute 30 µl de la solution d’injection.
Appliquer le vide pendant 5 minutes.
Ajouter 30 µl de la solution et bien mélanger avec la pipette puis transférer vers la plaque du
séquenceur pour lacer le séquençage.