msrocmMrs sr CYTOCHIMΠANIMALE.
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susceptible, par suite de l’impureté des préparations commerciales,
d'éliminer des mucopolysaccharides et des mucoprotéines et de donner
lieu à des erreurs d‘interprétation lors de la recherche du glycogène. Pour
ce motif, et contrairement à l’opinion de certains livres récents de micro—
technique, nous continuons à préférer la digestion salivaire, tout au moins
jusqu’au moment où des préparations de diastase raisonnablement pures
seront disponibles commercialement.
Technique de la digestion par l'amylase, voir p. 748.
N. Enzymes hydrolysant les mucopalysaccharid@s et mucaprotéines. —
Nous étudierons successivement : l'hyaluronidase, la pyocyanine et la
pectinase.
Hyaluronidase. — L'hyaluronidase est une enzyme qui attaque l‘acide
liyaluronique en causant successivement (KENT et WHITEHOUSE, 1955) :
a. une perte de la précipitabilité de l'acide hyaluronique par l'acide acétique;
17. sa dépolymérisation avec diminution considérable de la viscosité;
c. le clivage des liaisons glycosidiques, avec production de disaccharides
et d’autres sucres réducteurs.
,
MANOZZI-TORINI (1942) a constaté que l'hyaluronidase fait disparaître
in vitro l’activité métachromatique de l'acide hyaluronique et que le
traitement de préparations histologiques par l'hyaluronidase supprime
la métachromasie de certains éléments.
Depuis cette époque, de très nombreux auteurs, dont la liste serait
trop longue pour être donnée ici, ont fait usage de l'hyaluronidase dans
le but principalement d’effectuer la distinction entre l‘acide hyaluronique
et les autres mucopolysaccharides acides.
Procédés. — On a utilisé avec succès des conditions d'incubation extrêmement variées,
ce qui démontre que l'action de l'hyaluronidase
pas très critique. Presque tous les
auteurs ont opéré à la température de 37°, soit en solution saline à 0,8 ou 0,9 %, ou en
présence de tampons (phosphate, borate, véronal, Mc llvaine) de pH compris entre 4,8
'
et 7 et de concentration allant de 0,2 à 0,015 M, pour des durées allant de 30 min à 24 heures
et jusqu'à 72 heures. Il est difcile de donner des indications précises, car la concentration
de l'enzyme est calculée, soit en poids de la préparation, soit en divers systèmes d'unités :
URT (unités de réduction de turbidité), URV (réduction de viscosité), URC (réduction
de coagulabilité) ; il n’est pas possible de comparer les résultats des activités exprimées
dans ces divers systèmes. Nous croyons que l'investigateur doit adapter sa technique au
matériel dont il dispose.
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susceptible, par suite de l’impureté des préparations commerciales,
d'éliminer des mucopolysaccharides et des mucoprotéines et de donner
lieu à des erreurs d‘interprétation lors de la recherche du glycogène. Pour
ce motif, et contrairement à l’opinion de certains livres récents de micro—
technique, nous continuons à préférer la digestion salivaire, tout au moins
jusqu’au moment où des préparations de diastase raisonnablement pures
seront disponibles commercialement.
Technique de la digestion par l'amylase, voir p. 748.
N. Enzymes hydrolysant les mucopalysaccharid@s et mucaprotéines. —
Nous étudierons successivement : l'hyaluronidase, la pyocyanine et la
pectinase.
Hyaluronidase. — L'hyaluronidase est une enzyme qui attaque l‘acide
liyaluronique en causant successivement (KENT et WHITEHOUSE, 1955) :
a. une perte de la précipitabilité de l'acide hyaluronique par l'acide acétique;
17. sa dépolymérisation avec diminution considérable de la viscosité;
c. le clivage des liaisons glycosidiques, avec production de disaccharides
et d’autres sucres réducteurs.
,
MANOZZI-TORINI (1942) a constaté que l'hyaluronidase fait disparaître
in vitro l’activité métachromatique de l'acide hyaluronique et que le
traitement de préparations histologiques par l'hyaluronidase supprime
la métachromasie de certains éléments.
Depuis cette époque, de très nombreux auteurs, dont la liste serait
trop longue pour être donnée ici, ont fait usage de l'hyaluronidase dans
le but principalement d’effectuer la distinction entre l‘acide hyaluronique
et les autres mucopolysaccharides acides.
Procédés. — On a utilisé avec succès des conditions d'incubation extrêmement variées,
ce qui démontre que l'action de l'hyaluronidase
pas très critique. Presque tous les
auteurs ont opéré à la température de 37°, soit en solution saline à 0,8 ou 0,9 %, ou en
présence de tampons (phosphate, borate, véronal, Mc llvaine) de pH compris entre 4,8
'
et 7 et de concentration allant de 0,2 à 0,015 M, pour des durées allant de 30 min à 24 heures
et jusqu'à 72 heures. Il est difcile de donner des indications précises, car la concentration
de l'enzyme est calculée, soit en poids de la préparation, soit en divers systèmes d'unités :
URT (unités de réduction de turbidité), URV (réduction de viscosité), URC (réduction
de coagulabilité) ; il n’est pas possible de comparer les résultats des activités exprimées
dans ces divers systèmes. Nous croyons que l'investigateur doit adapter sa technique au
matériel dont il dispose.