Chapitre 4
Echantillonnage & Matériels et méthodes
36
Concentration.
La concentration de l’extrait d’eau de mer est réalisée dans le but d’éliminer le solvant
d’extraction à l’aide d’un évaporateur rotatif. Pour éviter l’évaporation des hydrocarbures
aromatiques à point d’ébullition bas, on concentre nos échantillons jusqu’à un volume de 15
ml. Pour minimiser cette perte, on maintient le bain-marie à une température de 40°C. Il subit
ensuite une deuxième concentration sous jet d’azote jusqu’à un volume de 5 ml.
Purification.
La purification de l’extrait d’eau de mer est généralement réalisée par chromatographie
liquide sur colonne ouverte de 10 mm de diamètre pour la rétention des composés polaires
(les lipides). Cette purification est généralement nécessaire lors de l’utilisation du
tétrachlorure de carbone (CCI 4 ) comme solvant de l’extraction.
2.3.1. La spectrophotométrie à rayonnement infrarouge.
Cette méthode globale d’estimation des hydrocarbures par infrarouge, bien que moins
sensible et moins précise que les méthodes d’analyse fine des constituants, est intéressante par
sa rapidité de mise en œuvre. Elle donne un indice global de contamination par les
hydrocarbures totaux et s’avère adaptée aux contrôles de routine ou au suivi de pollutions
accidentelles (Volhardt et Schore, 1995).
Les bandes d’absorption des spectres infrarouges des hydrocarbures sont dues aux
vibrations de valence et de déformation des atomes de carbone et d’hydrogène impliqués dans
les deux types de liaisons covalentes de la méthode C-H et C-C.
Principe de la méthode d’analyse.
Les spectres infrarouges permettent une véritable analyse fonctionnelle des molécules
organiques. Aussi, la méthode s’applique à tous les hydrocarbures extractibles au
tétrachlorure de carbone CCl 4 et susceptibles d’absorber le rayonnement infrarouge dans la
région de nombre d’ondes restreinte comprise entre 3000 et 2600 cm
-1 et correspondant aux
vibrations de valence C-H des groupements -CH 3 , -CH 2 et CH-. Les énergies absorbées
varient de 4 à 40 KJ/mol.
Appareillage analytique.
Les mesures de concentration sont réalisées à l’aide d’un spectrophotomètre infrarouge,
type PYE Unicam Ltd PHILIPS modèle SP3 – 300 à doubles faisceaux. Des cellules en quartz
avec un trajet optique de 4cm d’une capacité volumique de 15ml ont été utilisées. Les lectures
ont été effectuées entre 3200cm
-1 et 2600 cm
-1 domaine d’absorbance optimale des
hydrocarbures.
Limite de détection.
La limite de détection moyenne est de 10 mg/l de solvant en l’occurrence de
tétrachlorure de carbone. Elle peut aller de 5 mg/l à 0.02 mg/l selon les performances de
l’appareil utilisé (Volhardt K.P et Schore N.E., 1995).
2.3.2. Spectrofluorimétrie à rayonnement Ultra-Violet (Marchand, 1983).
C’est une technique analytique plus performante que la spectrophotométrie infrarouge.
Elle nécessite des radiations électromagnétiques comprises entre 200 et 400 nm dont l’énergie
est élevée. Cette méthode fournie, en outre, un excellent indice de pollution pétrolière du fait
Echantillonnage & Matériels et méthodes
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Concentration.
La concentration de l’extrait d’eau de mer est réalisée dans le but d’éliminer le solvant
d’extraction à l’aide d’un évaporateur rotatif. Pour éviter l’évaporation des hydrocarbures
aromatiques à point d’ébullition bas, on concentre nos échantillons jusqu’à un volume de 15
ml. Pour minimiser cette perte, on maintient le bain-marie à une température de 40°C. Il subit
ensuite une deuxième concentration sous jet d’azote jusqu’à un volume de 5 ml.
Purification.
La purification de l’extrait d’eau de mer est généralement réalisée par chromatographie
liquide sur colonne ouverte de 10 mm de diamètre pour la rétention des composés polaires
(les lipides). Cette purification est généralement nécessaire lors de l’utilisation du
tétrachlorure de carbone (CCI 4 ) comme solvant de l’extraction.
2.3.1. La spectrophotométrie à rayonnement infrarouge.
Cette méthode globale d’estimation des hydrocarbures par infrarouge, bien que moins
sensible et moins précise que les méthodes d’analyse fine des constituants, est intéressante par
sa rapidité de mise en œuvre. Elle donne un indice global de contamination par les
hydrocarbures totaux et s’avère adaptée aux contrôles de routine ou au suivi de pollutions
accidentelles (Volhardt et Schore, 1995).
Les bandes d’absorption des spectres infrarouges des hydrocarbures sont dues aux
vibrations de valence et de déformation des atomes de carbone et d’hydrogène impliqués dans
les deux types de liaisons covalentes de la méthode C-H et C-C.
Principe de la méthode d’analyse.
Les spectres infrarouges permettent une véritable analyse fonctionnelle des molécules
organiques. Aussi, la méthode s’applique à tous les hydrocarbures extractibles au
tétrachlorure de carbone CCl 4 et susceptibles d’absorber le rayonnement infrarouge dans la
région de nombre d’ondes restreinte comprise entre 3000 et 2600 cm
-1 et correspondant aux
vibrations de valence C-H des groupements -CH 3 , -CH 2 et CH-. Les énergies absorbées
varient de 4 à 40 KJ/mol.
Appareillage analytique.
Les mesures de concentration sont réalisées à l’aide d’un spectrophotomètre infrarouge,
type PYE Unicam Ltd PHILIPS modèle SP3 – 300 à doubles faisceaux. Des cellules en quartz
avec un trajet optique de 4cm d’une capacité volumique de 15ml ont été utilisées. Les lectures
ont été effectuées entre 3200cm
-1 et 2600 cm
-1 domaine d’absorbance optimale des
hydrocarbures.
Limite de détection.
La limite de détection moyenne est de 10 mg/l de solvant en l’occurrence de
tétrachlorure de carbone. Elle peut aller de 5 mg/l à 0.02 mg/l selon les performances de
l’appareil utilisé (Volhardt K.P et Schore N.E., 1995).
2.3.2. Spectrofluorimétrie à rayonnement Ultra-Violet (Marchand, 1983).
C’est une technique analytique plus performante que la spectrophotométrie infrarouge.
Elle nécessite des radiations électromagnétiques comprises entre 200 et 400 nm dont l’énergie
est élevée. Cette méthode fournie, en outre, un excellent indice de pollution pétrolière du fait