Deuxième partie
Matériel et méthodes
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On lave la phase éthérée avec 50 ml de KOH hydrique, ensuite 50 ml d’eau distillée
On élimine la phase hydrique, puis on prélève 10 ml de la phase éthérée, évapore le solvant
(diéthyl éther) dans un rotavapor à une température de 40°C.
Le résidu est récupéré avec 10 ml d’éther de pétrole afin de pouvoir faire la lecture
spectrophotométrique.
3.2
Lecture spectrophotométrique :
Après récupération du résidu contenant les caroténoïdes, on fait rapidement une lecture au
spectrophotomètre contre l’éther de pétrole comme un blanc à une longueur d’onde de l’ordre
de 440 nm.
3.2.1 Préparation de la courbe d’étalonnage :
Benk (1960) a décrit que la dissolution de 36 mg de bichromate de potassium dans 100 ml
d’eau distillée donne une concentration correspondante à 26,6 mg/l de caroténoïdes totaux
représentés par le ß-carotène.
Il faut mettre au point une série de solutions standards qui correspondent à des
concentrations en caroténoïdes suivantes : 3, 6, 9, 12, 15 et 20 mg/l.
Après une lecture de ces standards au spectrophotomètre dans le domaine visible à une
longueur d’onde de 440 nm, contre l’éther de pétrole (comme blanc) pour la détermination de
l’absorbance de chaque standard (Adel in Sali 2007). Les résultats sont regroupés dans le
tableau 2.2.
Tableau 2.2 : Masses de bichromate de potassium dissoutes dans 10 ml d’eau distillée,
concentrations équivalentes en caroténoïdes et leurs absorbances.
Standards
Poids de
bichromate
de potassium
(g)
Concentrations
de bichromate
de potassium
(mg/l)
Concentrations
équivalentes en
caroténoïdes
totaux (mg/l)
Absorbance
(450nm)
Absorbance
(440 nm)
S1
0,406
40,6
3
0,083
0,094
S2
0,812
81,2
6
0,131
0,136
S3
1,218
121,8
9
0,174
0,193
S4
1,624
162,4
12
0,212
0,216
S5
2,03
203
15
0,241
0,327
SM
3,6
360
26,6
0,533
0,506
SM : Solution mère.