Deuxième partie
Matériel et méthodes
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3. Méthode d’analyse des pigments (provitamines A)
3.1 Extraction des pigments (provitamines A) :
3.1.1
Extraction des pigments (provitamines A) à partir du sang :
Mode opératoire :
a) Préparation du sérum :
Décongeler le sérum à une température ambiante puis commencer l’extraction des
provitamines A dans un bac de glace.
b) Extraction des provitamines A :
 Après la décongélation du sérum, on prend 1 ml dans un tube à essai puis on ajoute 2
ml d’éthanol et on agite au vortex pendant 8 à 10 min.
Figure 2.18 : agitation du tube contenant le mélange au vortex.
 Après précipitation de 5 mn, on a apparition de deux phases : une éthanoïque et l’autre
organique.
 Après l’élimination de la phase éthanoïque, on a additionné 3 ml d’éther de pétrole
qu’on centrifuge à 300 tr/min durant 10 min à 4°C.
 A l’aide d’une micropipette, on récupère le surnageant (phase éthérée), et on procède à
une lecture rapide au spectrophotomètre à une longueur d’onde
λ = 450 nm, contre un blanc : l’éther de pétrole.
3.1.2 Extraction des pigments (provitamines A) à partir de la chair :
Mode opératoire :
On prend 0,5 g de la chair lyophilisée, et on ajoute 2 ml d’acétone, 2 ml d’éther de pétrole
et une pincée de l’acide ascorbique (anti-oxydant), puis 15 ml de KOH éthanoïque et on
chauffe le mélange à une température de 40°C dans un bain marie (annexe 2) pendant 10 min
puis on le refroidit rapidement dans un bac de glace.