CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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2.2. Etude biochimique
2.2.1. Détermination du taux de caroténoïdes
2.2.1.1. Extraction
L’extraction des caroténoïdes ainsi que toutes les analyses biochimiques ont été effectuées au
niveau du laboratoire de biochimie de l’ENSSMAL.
L’extraction a été réalisée à partir des six échantillons d’algues récoltées. On notera : Rhodo 1,
Rhodo 2, Chromo 1, Chromo 2, Chloro 1 et Chloro 2 pour les deux algues rouges, les deux brunes
et les deux vertes, respectivement.
La méthode utilisée pour cela est la suivante (C. Akrour-Aissou,2020.Protocole travaux pratiques
Nutrition-Alimentation,4 ème année Aquaculture ):
Filtration sous vide :
-Filtration de 10 g de poudre de chaque échantillon dans un Buchner sous vide avec 40 ml
d’Hexane- Ethanol (1 :1). (maintien du mélange pendant quelques minutes).
-Poursuite de la filtration jusqu’à la décoloration du résidu. (épuisement de l’échantillon 3 à 4
fois),soit V1 ce volume.
Saponification :
-Ajout d’un volume égal de KOH méthanoïque 10 % à la solution V1 obtenue.
-Chauffage du mélange pendant 10 min sur une plaque chauffante à 40°C puis refroidissement
direct dans un bac de glace.
Lavage :
-Transvasement du mélange dans une ampoule à décanter avec ajout de 25 ml d’Hexane et 20 ml
d’eau distillée.
-Légère agitation de 30 à 60 secondes et décantation.
-Après décantation, obtention de 2 phases : organique et aqueuse.
-Extraction de la phase aqueuse 2 fois par 40 ml de solvant Ethanol-Hexane (1 :1).
(Récupération de la deuxième phase organique et rajout à la première).
-Evaporation de la solution obtenue dans un rotavapor à 40 °C pour la récupération de l’Hexane.