CHAPITRE II. MATERIEL ET METHODES
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probable, par le calcul ou la consultation de la table de Mc Grady) (Voir annexe 1). Cette
méthode est utilisée pour évaluer la charge microbienne des effluents bruts de Danone.
• Soit par filtration sur membrane à 0,45 en milieu solide en supposant la disponibilité
d’une rampe de filtration.
La technique en milieu liquide fait appel à deux tests consécutifs à savoir (LEBRES et al,
2002) (Figure II.11) :
- Le test de présomption : réservé à la recherche des Coliformes totaux.
- Le test de confirmation : encore appelé test de Mac Kenzie et réservé à la recherche des
Coliformes fécaux à partir des tubes positifs du test de présomption.
Les tubes présentant à la fois : un dégagement gazeux (supérieur au 1/10 de la hauteur de la
cloche) et un trouble microbien sont considérés comme positifs (LEBRES et al, 2002).
Le test de confirmation ou test de Mac Kenzie est basé sur la recherche de Coliformes
thermotolérants parmi lesquels on redoute surtout la présence d’Escherichia coli. Les coliformes
thermotolérants ont les mêmes propriétés de fermentation que les coliformes mais à 44°C.
Escherichia coli est un coliforme thermotolérant qui entre autres produit de l’indole à partir du
tryptophane à 44°C, donne un résultat positif à l’essai au rouge de méthyl, ne produit pas de
l’acéthyl méthyl carbinol et n’utilise pas le citrate comme source unique de carbone (LEBRES et
al, 2002).
3.2. Streptométrie en milieu liquide par la méthode du nombre le plus
probable (NPP)
Les Streptocoques fécaux ou Streptocoques du groupe D de la classification de Lancefield, se
présentent sous forme de cocci à Gram +, sphériques à ovoïdes formant des chaînettes, ne
possédant pas de catalase mais possédant l’antigène du groupe D. Ils sont capables de se
développer en 24 à 48 heures à 37°C sur un milieu sélectif à l’azoture de sodium en donnant des
colonies caractéristiques réduisant le TTC et qui de plus hydrolysent l’esculine en 48 heures à
44°C après repiquage d’une colonie sur une gélose biliée à l’esculine. Leur recherche et leur
dénombrement peut se faire de la même manière que pour les coliformes, c’est à dire à l’aide de
deux méthodes distinctes selon la disponibilité ou non d’une rampe de filtration et seuls les
milieux de culture changent. La recherche et le dénombrement des Streptocoques fécaux fait
appel à deux tests consécutifs à savoir (LEBRES et al, 2002) :
• Le test de présomption sur milieu Rothe
• Le test de confirmation : réservé à la confirmation réelle des Streptocoques fécaux à
partir des tubes positifs du test de présomption. Les tubes présentant un trouble microbien
sont considérés comme positifs, seulement ces derniers, ne doivent en aucun cas faire
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probable, par le calcul ou la consultation de la table de Mc Grady) (Voir annexe 1). Cette
méthode est utilisée pour évaluer la charge microbienne des effluents bruts de Danone.
• Soit par filtration sur membrane à 0,45 en milieu solide en supposant la disponibilité
d’une rampe de filtration.
La technique en milieu liquide fait appel à deux tests consécutifs à savoir (LEBRES et al,
2002) (Figure II.11) :
- Le test de présomption : réservé à la recherche des Coliformes totaux.
- Le test de confirmation : encore appelé test de Mac Kenzie et réservé à la recherche des
Coliformes fécaux à partir des tubes positifs du test de présomption.
Les tubes présentant à la fois : un dégagement gazeux (supérieur au 1/10 de la hauteur de la
cloche) et un trouble microbien sont considérés comme positifs (LEBRES et al, 2002).
Le test de confirmation ou test de Mac Kenzie est basé sur la recherche de Coliformes
thermotolérants parmi lesquels on redoute surtout la présence d’Escherichia coli. Les coliformes
thermotolérants ont les mêmes propriétés de fermentation que les coliformes mais à 44°C.
Escherichia coli est un coliforme thermotolérant qui entre autres produit de l’indole à partir du
tryptophane à 44°C, donne un résultat positif à l’essai au rouge de méthyl, ne produit pas de
l’acéthyl méthyl carbinol et n’utilise pas le citrate comme source unique de carbone (LEBRES et
al, 2002).
3.2. Streptométrie en milieu liquide par la méthode du nombre le plus
probable (NPP)
Les Streptocoques fécaux ou Streptocoques du groupe D de la classification de Lancefield, se
présentent sous forme de cocci à Gram +, sphériques à ovoïdes formant des chaînettes, ne
possédant pas de catalase mais possédant l’antigène du groupe D. Ils sont capables de se
développer en 24 à 48 heures à 37°C sur un milieu sélectif à l’azoture de sodium en donnant des
colonies caractéristiques réduisant le TTC et qui de plus hydrolysent l’esculine en 48 heures à
44°C après repiquage d’une colonie sur une gélose biliée à l’esculine. Leur recherche et leur
dénombrement peut se faire de la même manière que pour les coliformes, c’est à dire à l’aide de
deux méthodes distinctes selon la disponibilité ou non d’une rampe de filtration et seuls les
milieux de culture changent. La recherche et le dénombrement des Streptocoques fécaux fait
appel à deux tests consécutifs à savoir (LEBRES et al, 2002) :
• Le test de présomption sur milieu Rothe
• Le test de confirmation : réservé à la confirmation réelle des Streptocoques fécaux à
partir des tubes positifs du test de présomption. Les tubes présentant un trouble microbien
sont considérés comme positifs, seulement ces derniers, ne doivent en aucun cas faire