Matériel et méthodes
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3. Dénombrement des coliformes totaux, Thermotolérants et E. coli par la
méthode du nombre le plus probable (NPP).
Conformément à la norme NF T90- 413, la numération des coliformes par la méthode des
NPP, la colimétrie se base sur la propriété commune des coliformes pour fermenter le lactose tout en
produisant du gaz dans une période de 24-48h, dans des tubes munis de cloches de Durham. La
présence des germes recherchés se traduit par : un trouble dans toute la masse liquide, un
dégagement de gaz dans les cloches et virage de couleur s’il y a présence d’indicateur de pH.
3.1 Dénombrement des coliformes totaux par la méthode des NPP
On prépare 3 séries de 3 tubes chacun contenant 9 ml de bouillon lactosé bilié au vert brillant
(BVBL) munis de cloches de Durham. Chacun des 3 tubes de la première série reçoit 1 ml de
la dilution 10° (solution mère). Les tubes de la deuxième et troisième série reçoivent
respectivement 1 ml de la dilution 10
-1 et 1 ml de la dilution 10
-2 . L’ensemble des tubes ainsi
préparé est incubé à 37°C pendant 24 à 48 heures (figure 13).
Le nombre caractéristique formé à partir des tubes de BVBL (trouble + gaz) sera lu dans la
table des NPP spéciale coquillage (Delarras, 2003).