Chapitre II
Matériel et méthodes
14
2.2. Type de reproducteurs
On peut observer dans les ovaires, des ovocytes de différentes tailles correspondant à différents
stades de développement. Une distribution unimodale suggère une ponte simple, alors que des
structures plurimodales laissent penser que l’on a affaire à des espèces qui ont une reproduction
fractionnée (Albaret, 1982).
Afin de déterminer de quel type de reproducteurs sont les trois espèces étudiées, connaître le
processus de maturation des gonades et estimer la taille des ovocytes susceptibles d’être pondus
dans l’année, des ovocytes appartenant à 2 femelles matures (stades II, III et IV) de chaque espèce
sont étalés sur une boite de pétri. Le diamètre ovocytaire a été mesuré à l’aide d’une loupe
binoculaire (Optech, Italie) équipée d’une caméra reliée par carte d’acquisition vidéo à un
ordinateur disposant du logiciel d’analyse d’images TSView (version 6.2.3.5. Tucsen, Chine). Le
champ de vision de la loupe binoculaire, affiché à l’écran, est alors numérisé. Chaque
grossissement utilisé (grossissement Gx 2) est calibré avec une lame micrométrique.
Figure II. 2 : Materiel utilisé pour determiner le type de reproducteur.
2.3. Fécondité absolue (individuelle)
La fécondité absolue correspond au nombre d’ovocytes matures contenus dans l’ovaire d’une
femelle à la veille de la ponte (Kartas et Quignard, 1984). Plusieurs méthodes de comptage par
sous-échantillonnage sont proposées par Aboussouan et Lahaye (1979) : échantillonnage par
surface, gravimétrique et volumétrique. Le comptage des ovocytes s’est réalisé selon la méthode
d’échantillonnage par volume de Bagenal (1957).
Les ovaires ont été conservés dans une solution de conservation et de dissociation de Gilson (100
ml alcool 60%, 800 ml eau, 15 ml acide nitrique 80%, 18 ml acide acétique glacial, 20 g chlorure
de mercure (Stéquert et Ramcharrun, 1995)), ceci afin de dilacérer les ovaires pour en faciliter la
séparation des ovocytes.
Ainsi, après filtration sur filtre synthétique, les ovocytes de réserve (cohorte d’ovocytes
susceptibles d’être matures seulement l’année suivante) sont éliminés pour une estimation plus
Matériel et méthodes
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2.2. Type de reproducteurs
On peut observer dans les ovaires, des ovocytes de différentes tailles correspondant à différents
stades de développement. Une distribution unimodale suggère une ponte simple, alors que des
structures plurimodales laissent penser que l’on a affaire à des espèces qui ont une reproduction
fractionnée (Albaret, 1982).
Afin de déterminer de quel type de reproducteurs sont les trois espèces étudiées, connaître le
processus de maturation des gonades et estimer la taille des ovocytes susceptibles d’être pondus
dans l’année, des ovocytes appartenant à 2 femelles matures (stades II, III et IV) de chaque espèce
sont étalés sur une boite de pétri. Le diamètre ovocytaire a été mesuré à l’aide d’une loupe
binoculaire (Optech, Italie) équipée d’une caméra reliée par carte d’acquisition vidéo à un
ordinateur disposant du logiciel d’analyse d’images TSView (version 6.2.3.5. Tucsen, Chine). Le
champ de vision de la loupe binoculaire, affiché à l’écran, est alors numérisé. Chaque
grossissement utilisé (grossissement Gx 2) est calibré avec une lame micrométrique.
Figure II. 2 : Materiel utilisé pour determiner le type de reproducteur.
2.3. Fécondité absolue (individuelle)
La fécondité absolue correspond au nombre d’ovocytes matures contenus dans l’ovaire d’une
femelle à la veille de la ponte (Kartas et Quignard, 1984). Plusieurs méthodes de comptage par
sous-échantillonnage sont proposées par Aboussouan et Lahaye (1979) : échantillonnage par
surface, gravimétrique et volumétrique. Le comptage des ovocytes s’est réalisé selon la méthode
d’échantillonnage par volume de Bagenal (1957).
Les ovaires ont été conservés dans une solution de conservation et de dissociation de Gilson (100
ml alcool 60%, 800 ml eau, 15 ml acide nitrique 80%, 18 ml acide acétique glacial, 20 g chlorure
de mercure (Stéquert et Ramcharrun, 1995)), ceci afin de dilacérer les ovaires pour en faciliter la
séparation des ovocytes.
Ainsi, après filtration sur filtre synthétique, les ovocytes de réserve (cohorte d’ovocytes
susceptibles d’être matures seulement l’année suivante) sont éliminés pour une estimation plus