Matériel et méthodes
40
• Incuber l’ensemble dans un bain-marie à 50°C pendant 20 min.
• Ajouter 2.5mL d’acide trichloracétique à 10% pour stopper la réaction et centrifuger les
tubes pendant 10min à 3000 rpm.
• Combiner une aliquote (2,5mL) de surnageant avec 2,5mL d’eau distillée et 0,5mL d’une
solution aqueuse de FeCl3 à 0,1%.
• Faire la lecture de l’absorbance du milieu réactionnel à 700nm contre un blanc
semblablement préparé, en remplaçant l’extrait par l’eau distillée qui permet de calibrer
l’appareil (UV-VIS spectrophotomètre).
Le contrôle positif est représenté par une solution d’un antioxydant standard ; l’acide ascorbique
dont l’absorbance a été mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons.
➢ Expressions des résultats :
La lecture se fait par spectrophotométrie à 700 nm ; Une augmentation de l’absorbance correspond
à une augmentation du pouvoir réducteur des extraits testés.
5.2 Polyphénols totaux :
La méthode utilisée pour le dosage des polyphénols totaux est la calorimétrie.
➢ Principe :
Les polyphénols constituent une famille de molécules organiques largement présente dans le règne
végétal. Ils sont caractériséscomme l’indique le nom, par la présence d'au moins deux groupes
phénoliques associés en structures plus ou moins complexes, généralement de haut poids
moléculaire. Ces composés sont les produits du métabolisme secondaire des plantes. Les
polyphénols prennent une importance croissante, notamment grâce à leur pouvoir antioxydant
naturel.
Ce dosage s’effectue au moyen du réactif de Folin-Ciocalteu ; ce dernier est constitué par un
mélange d’acide phototungstique et d’acide phosphomolybdique qui est réduit lors de l’oxydation
des polyphénols, en mélange d’oxydes bleus de tungstène et de molybdène. La coloration bleue
est mesurée à 750 nm. La méthode est standardisée par rapport à l’acide gallique.
➢ Mode opératoire :
Le dosage de polyphénols a été effectué selon la méthode décrite par BENARIBA et al. ,2013 :
• Mélanger 0,1mL de chaque extrait avec 2mL d’une solution de carbonate de sodium à 2%
avec une agitation des tubes ;
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• Incuber l’ensemble dans un bain-marie à 50°C pendant 20 min.
• Ajouter 2.5mL d’acide trichloracétique à 10% pour stopper la réaction et centrifuger les
tubes pendant 10min à 3000 rpm.
• Combiner une aliquote (2,5mL) de surnageant avec 2,5mL d’eau distillée et 0,5mL d’une
solution aqueuse de FeCl3 à 0,1%.
• Faire la lecture de l’absorbance du milieu réactionnel à 700nm contre un blanc
semblablement préparé, en remplaçant l’extrait par l’eau distillée qui permet de calibrer
l’appareil (UV-VIS spectrophotomètre).
Le contrôle positif est représenté par une solution d’un antioxydant standard ; l’acide ascorbique
dont l’absorbance a été mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons.
➢ Expressions des résultats :
La lecture se fait par spectrophotométrie à 700 nm ; Une augmentation de l’absorbance correspond
à une augmentation du pouvoir réducteur des extraits testés.
5.2 Polyphénols totaux :
La méthode utilisée pour le dosage des polyphénols totaux est la calorimétrie.
➢ Principe :
Les polyphénols constituent une famille de molécules organiques largement présente dans le règne
végétal. Ils sont caractériséscomme l’indique le nom, par la présence d'au moins deux groupes
phénoliques associés en structures plus ou moins complexes, généralement de haut poids
moléculaire. Ces composés sont les produits du métabolisme secondaire des plantes. Les
polyphénols prennent une importance croissante, notamment grâce à leur pouvoir antioxydant
naturel.
Ce dosage s’effectue au moyen du réactif de Folin-Ciocalteu ; ce dernier est constitué par un
mélange d’acide phototungstique et d’acide phosphomolybdique qui est réduit lors de l’oxydation
des polyphénols, en mélange d’oxydes bleus de tungstène et de molybdène. La coloration bleue
est mesurée à 750 nm. La méthode est standardisée par rapport à l’acide gallique.
➢ Mode opératoire :
Le dosage de polyphénols a été effectué selon la méthode décrite par BENARIBA et al. ,2013 :
• Mélanger 0,1mL de chaque extrait avec 2mL d’une solution de carbonate de sodium à 2%
avec une agitation des tubes ;