Matériel et méthodes
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3.3.5. Recherche et dénombrement des Staphylococcus aureus
▪ Principe :
Pour la recherche des Staphylococcus aureus on a utilisé le milieu Baird Parker. Les
Staphylocoques se sont des Cocci qui se présentent en amas, Gram positif, aérobie anaérobie
facultative, toutes les souches pathogènes des Staphylocoques sont coagulase positive et
fermentent le glucose (FAO, 1988).
▪ Mode opératoire :
- Dans une zone aseptique couler le milieu Baird Parker en boites de pétri à raison
de : une boite pour chaque dilution 10
-1 , 10
-2 , 10
-3 de chaque échantillon.
- Laisser le milieu se solidifié.
- Porter 0.1 ml de chaque dilution.
- Etaler avec un écouvillon stérile toute la surface de la boite pour avoir des
colonies bien isolées.
- Incuber 37°C pendant 24 voire 48 heures.
▪ Lecture : On compte les colonies noires rondes d’un diamètre de 1 à 1.5 mm,
entourées d’une zone d’éclaircissement.
• Test de confirmation de Staphylococcus aureus :
Coloration de Gram :
▪ Principe :
La coloration de Gram est la coloration différentielle microbiologique la plus importante et la
plus largement utilisée. Elle permet de différencier les bactéries selon 2 critères : leur forme et
leur affinité pour les colorants. Les parois des bactéries à Gram négatif ont un taux élevé de
lipides (à cause de la membrane externe) et une fine couche de peptidoglycane.
▪ Mode opératoire :
➢ Préparation d’un frottis sec et fixé :
Le frottis destiné à la coloration doit être étalé en couche mince et régulière, séché le plus
souvent fixé.
- Déposer une goutte d’eau distillée une lame propre et dégraissée puis prélever
une colonie bien isolée.
- Etaler par un mouvement circulaire régulier.
- Sécher la lame au dessous de la flamme de bec bunsen jusqu’à obtention de
l’aspect mat.
- Passer la lame 3 fois sur la flamme pour fixer les bactéries.
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3.3.5. Recherche et dénombrement des Staphylococcus aureus
▪ Principe :
Pour la recherche des Staphylococcus aureus on a utilisé le milieu Baird Parker. Les
Staphylocoques se sont des Cocci qui se présentent en amas, Gram positif, aérobie anaérobie
facultative, toutes les souches pathogènes des Staphylocoques sont coagulase positive et
fermentent le glucose (FAO, 1988).
▪ Mode opératoire :
- Dans une zone aseptique couler le milieu Baird Parker en boites de pétri à raison
de : une boite pour chaque dilution 10
-1 , 10
-2 , 10
-3 de chaque échantillon.
- Laisser le milieu se solidifié.
- Porter 0.1 ml de chaque dilution.
- Etaler avec un écouvillon stérile toute la surface de la boite pour avoir des
colonies bien isolées.
- Incuber 37°C pendant 24 voire 48 heures.
▪ Lecture : On compte les colonies noires rondes d’un diamètre de 1 à 1.5 mm,
entourées d’une zone d’éclaircissement.
• Test de confirmation de Staphylococcus aureus :
Coloration de Gram :
▪ Principe :
La coloration de Gram est la coloration différentielle microbiologique la plus importante et la
plus largement utilisée. Elle permet de différencier les bactéries selon 2 critères : leur forme et
leur affinité pour les colorants. Les parois des bactéries à Gram négatif ont un taux élevé de
lipides (à cause de la membrane externe) et une fine couche de peptidoglycane.
▪ Mode opératoire :
➢ Préparation d’un frottis sec et fixé :
Le frottis destiné à la coloration doit être étalé en couche mince et régulière, séché le plus
souvent fixé.
- Déposer une goutte d’eau distillée une lame propre et dégraissée puis prélever
une colonie bien isolée.
- Etaler par un mouvement circulaire régulier.
- Sécher la lame au dessous de la flamme de bec bunsen jusqu’à obtention de
l’aspect mat.
- Passer la lame 3 fois sur la flamme pour fixer les bactéries.