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démarche intégrée permet d’identifier les stocks au sens génétique pour une évaluation juste
de la biomasse existante.
Deux amorces RAPD : A-01 (5_-AGGGGTCTTG-3_) et A-10 (5_GTGATCGCAG-3_),
synthétisées par la société Operon Technologies Inc, ont été utilisé pour l’amplification.
La PCR est réalisée dans un volume réactionnel de 25 μl, contenant 5 μl d’extrait
D’ADN, 2 mM de MgCl2, 0,4 mM de chaque dNTP, 0,6 μM d’amorce, 0,15 mg/ml de
bovineserum albumine (BSA), 0,1 U de Taq et 1X buffer (Promega Corp. Madison, WI). La
PCR est réalisée dans un thérmocycleur Gene Amp. ®PCR System 9700
(AppliedBiosystems).
Le programme d’amplification consiste en une dénaturation de 5 minutes à 94° C, puis en 44
cycles de dénaturation à 94° C(45 sec), une hybridation à 37° C (1 mn) et une polymérisation
à 72° C (2 mn), suivis d’une phase d’élongation finale de 10 mn à 72° C.
Les produits d’amplification sont visualisés par une électrophorèse sur un gel d’agarose à 2
%, coloré au bromure d’éthidium. La durée de migration est de 3 h à 100 V (Chaoui, 2007).
Les amorces RAPD utilisées ont produit des fragments ayant des tailles comprises entre 165
et 650 pb. Parmi les 29 bandes obtenues, 19 sont polymorphes, soient six pour l’amorce A01(A-01 380, A-01 460, A-01 550, A-01 600, A-01 630 et A-01 650) et treize pour l’amorce
A-10 (A-10 165, A-10 180, A-10 220, A-10 280, A-10 340, A-10 380, A-10 435, A-10 480,
A- 10 490, A-10 530, A-10 560, A-10 580, A-10 600) (Chaoui, 2007).
Figure II.29: Profils RAPD, après coloration au BET et électrophorèse sur gel d’agarose à 2
%, des produits d’amplification obtenus avec les amorces A01 et A10
(Mq: marqueur de taille, pb: paires de bases) (Chaoui, 2007).
démarche intégrée permet d’identifier les stocks au sens génétique pour une évaluation juste
de la biomasse existante.
Deux amorces RAPD : A-01 (5_-AGGGGTCTTG-3_) et A-10 (5_GTGATCGCAG-3_),
synthétisées par la société Operon Technologies Inc, ont été utilisé pour l’amplification.
La PCR est réalisée dans un volume réactionnel de 25 μl, contenant 5 μl d’extrait
D’ADN, 2 mM de MgCl2, 0,4 mM de chaque dNTP, 0,6 μM d’amorce, 0,15 mg/ml de
bovineserum albumine (BSA), 0,1 U de Taq et 1X buffer (Promega Corp. Madison, WI). La
PCR est réalisée dans un thérmocycleur Gene Amp. ®PCR System 9700
(AppliedBiosystems).
Le programme d’amplification consiste en une dénaturation de 5 minutes à 94° C, puis en 44
cycles de dénaturation à 94° C(45 sec), une hybridation à 37° C (1 mn) et une polymérisation
à 72° C (2 mn), suivis d’une phase d’élongation finale de 10 mn à 72° C.
Les produits d’amplification sont visualisés par une électrophorèse sur un gel d’agarose à 2
%, coloré au bromure d’éthidium. La durée de migration est de 3 h à 100 V (Chaoui, 2007).
Les amorces RAPD utilisées ont produit des fragments ayant des tailles comprises entre 165
et 650 pb. Parmi les 29 bandes obtenues, 19 sont polymorphes, soient six pour l’amorce A01(A-01 380, A-01 460, A-01 550, A-01 600, A-01 630 et A-01 650) et treize pour l’amorce
A-10 (A-10 165, A-10 180, A-10 220, A-10 280, A-10 340, A-10 380, A-10 435, A-10 480,
A- 10 490, A-10 530, A-10 560, A-10 580, A-10 600) (Chaoui, 2007).
Figure II.29: Profils RAPD, après coloration au BET et électrophorèse sur gel d’agarose à 2
%, des produits d’amplification obtenus avec les amorces A01 et A10
(Mq: marqueur de taille, pb: paires de bases) (Chaoui, 2007).