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Application de la PCR-RFLP
Le potentiel de cette technique a été mis en évidence pour l’identification des espèces de
poisson en basant sur l’amplification d’une partie spécifique du génome mitochondrial
(tRNAGlu/cytochrome b) Afin de distinguer entre diverses espèces, les longs fragments de
464 paires de bases obtenus par PCR sont coupés avec différentes endonucléases, ce qui
donne des fragments de restriction spécifiques de l’espèce. Cette méthode est applicable pour
distinguer, le saumon de l’Atlantique des diverses espèces de saumon du Pacifique(Wolf, et
al., 2000).
Lin et Hwangont utilisé cette technique pour identifier huit espèces de scombridés. Deux
paires d'amorces ont été conçues pour amplifier 126 et 146 pb du gène du cytochrome b
mitochondrial et cinq enzymes de restriction ont été déterminées pour analyser des fragments
de courte longueur. La méthode a été appliquée avec succès à l'authentification des espèces
dans 18 thons en conserve commerciale (Teletchea, 2009).
2.2.4.
RFLP (Le polymorphisme de longueurs des fragments de
restriction)
Le polymorphisme de longueur d'éclat de restriction (RFLP) est une technique inventée en
1984 par le scientifique anglais Alec Jeffreys pendant la recherche dans des maladies
héréditaires. Il est employé pour l'analyse de seules configurations dans les fragments d'ADN
afin de différencier génétiquement entre les organismes, ces configurations sont Variable
Number appelé des séquences répétées en tandem (VNTRs) (Bakhti, 2011).
Cette technique à pour base l'utilisation des enzymes de restriction (endonucléase) sur des
ADN en vue de détecter des séquences courtes spécifiques. Les fragments d'ADN obtenus
sont séparés par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite transférés sur une membrane
selon la procédure de southern blot. La taille des fragments est déterminée par hybridation
des membranes avec des sondes (fragment d'ADN) marquées. Les sondes peuvent être des
séquences d'ADN courtes et simples, de faibles copies d'ADN génomique ou encore des
clones d'ADN complémentaire (Bakhti, 2011).
Les mutations dans le génome entraînant la modification de certains sites de restriction d'où
la génération de différents profils de restriction entre différents échantillon. Chaque fragment
de taille différent engendré est considéré comme allèle et peut être utilisé en analyse
génétique (Bakhti, 2011).
Application de la PCR-RFLP
Le potentiel de cette technique a été mis en évidence pour l’identification des espèces de
poisson en basant sur l’amplification d’une partie spécifique du génome mitochondrial
(tRNAGlu/cytochrome b) Afin de distinguer entre diverses espèces, les longs fragments de
464 paires de bases obtenus par PCR sont coupés avec différentes endonucléases, ce qui
donne des fragments de restriction spécifiques de l’espèce. Cette méthode est applicable pour
distinguer, le saumon de l’Atlantique des diverses espèces de saumon du Pacifique(Wolf, et
al., 2000).
Lin et Hwangont utilisé cette technique pour identifier huit espèces de scombridés. Deux
paires d'amorces ont été conçues pour amplifier 126 et 146 pb du gène du cytochrome b
mitochondrial et cinq enzymes de restriction ont été déterminées pour analyser des fragments
de courte longueur. La méthode a été appliquée avec succès à l'authentification des espèces
dans 18 thons en conserve commerciale (Teletchea, 2009).
2.2.4.
RFLP (Le polymorphisme de longueurs des fragments de
restriction)
Le polymorphisme de longueur d'éclat de restriction (RFLP) est une technique inventée en
1984 par le scientifique anglais Alec Jeffreys pendant la recherche dans des maladies
héréditaires. Il est employé pour l'analyse de seules configurations dans les fragments d'ADN
afin de différencier génétiquement entre les organismes, ces configurations sont Variable
Number appelé des séquences répétées en tandem (VNTRs) (Bakhti, 2011).
Cette technique à pour base l'utilisation des enzymes de restriction (endonucléase) sur des
ADN en vue de détecter des séquences courtes spécifiques. Les fragments d'ADN obtenus
sont séparés par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite transférés sur une membrane
selon la procédure de southern blot. La taille des fragments est déterminée par hybridation
des membranes avec des sondes (fragment d'ADN) marquées. Les sondes peuvent être des
séquences d'ADN courtes et simples, de faibles copies d'ADN génomique ou encore des
clones d'ADN complémentaire (Bakhti, 2011).
Les mutations dans le génome entraînant la modification de certains sites de restriction d'où
la génération de différents profils de restriction entre différents échantillon. Chaque fragment
de taille différent engendré est considéré comme allèle et peut être utilisé en analyse
génétique (Bakhti, 2011).