Chapitre II: matériel et méthodes
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l’établissement du nombre le plus probable à l’aide de la table de Mc Grady (Annexe
IV) qui donne pour chaque chiffre caractéristique le nombre de cellules le plus
probable dans un 1ml du suspension utilisé. (Brisou et Denis, 1980 in Rodier et al,
2005).
Mode opératoire
 On prépare le sédiment à analyser ;
 On pèse 25g devant un bec benzène et lui rajouter 225 ml d’eau distillée stérile
dans un flacon stérile, bien homogénéiser le tout (dilution mère : 10
-1
) ;
 On prend 10 ml à l’aide d’une pipette graduée stérile de DM pour la mettre dans
un tube stérile ( 10
-1
), de même préparer d’autres dilutions : 10
-2
et 10
-3
.
A. Dénombrement des coliformes totaux et des coliformes fécaux
A partir de chaque dilution, prélever 1ml et ensemencer une série de trois tubes
contenant 10 ml du bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB) et une cloche de
Durham. L’incubation se fait à 37°C pour les tubes destinés au dénombrement des
coliformes totaux et à 44°C pour les coliformes fécaux pendant 24 h à 48 h.(Figure
II.15).
 Lecture
Les tubes présentant un trouble avec production de gaz au niveau de la cloche sont
considérés comme positifs.
B. Dénombrement des streptocoques fécaux (Figure II.16)
La technique de recherche des streptocoques fécaux nécessite deux tests :
 Test présomptif: réalisé sur le milieu de Roth simple concentration pour
l’ensemencement des dilutions.
 Test confirmatif: se fait par repiquage des tubes positifs sur le milieu d’Eva
Litsky.
 Lecture : Après incubation à 37°C pendant 24 h à 48 h :
Milieu de Rothe : les tubes positifs présentent un trouble.
Milieu d’Eva Litsky : les tubes positifs présentent un trouble accompagné d’une
pastille violette au fond.