• Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de mesure en le prélevant par
aspiration lente (pipette, seringue, etc.) en veillant à ne pas prendre de fibres et non en
le transvasant directement (entraî- nement des fibres).
Attention : ces précautions de transfert sont très importantes pour réduire le blanc en
spectrophotométrie et diminuer la variabilité des mesures.
e. Calcul des concentrations
- Mesure des blancs
Les blancs de cuve sont les mesures d'absorbance obtenues à chacune des longueurs
d'ondes (À) de la méthode en mettant le solvant d'extraction dans les cuves utilisées.
En mode double faisceau, laisser toujours la même cuve en référence, sans changer sa
position sur le support. Les blancs de cuve sont mesurés une fois avec chaque série
d'analyses. Vérifier que les blancs de cuve sont inchangés lorsque l'acétone est
acidifiée. Si ce n'est pas le cas, en tenir compte dans les calculs.
Le blanc de turbidité (B) de l'échantillon résulte de fines particules, de fibres du
filtre mal centrifugées ou de colloïdes éventuels. On mesure le blanc de turbidité de
chaque échantillon à la longueur d'onde de 750nm à laquelle les pigments n'absorbent
pas : on obtient :le blanc brut Brut.
Le blanc net de turbidité est obtenu en soustrayant le blanc des cuves : B = Brut -
bc750.
Ce blanc doit être inférieur à 0,005 unité d'absorbance par centimètre de trajet optique.
Contrôler la stabilité du blanc de turbidité entre le début et la fin des mesures sur un
échantillon : sa décroissance traduit la présence de particules et, par conséquent, des
mesures d'absorbance erronées. Si le blanc est trop élevé ou varie en cours de mesure,
améliorer les conditions de centrifugation ou de transfert de l'extrait.
Chlorophylle A
Ca=27*[(Ao 665-Ao 750)-(Aa 665-Aa 750)]*(v/(L*/V)
Ou :
Ao 665 & Ao750 = Absorbances à 665 et 750 nm avant acidification.
Aa 665 & Aa750 = Absorbances à 665 et 750 nm après acidification.
aspiration lente (pipette, seringue, etc.) en veillant à ne pas prendre de fibres et non en
le transvasant directement (entraî- nement des fibres).
Attention : ces précautions de transfert sont très importantes pour réduire le blanc en
spectrophotométrie et diminuer la variabilité des mesures.
e. Calcul des concentrations
- Mesure des blancs
Les blancs de cuve sont les mesures d'absorbance obtenues à chacune des longueurs
d'ondes (À) de la méthode en mettant le solvant d'extraction dans les cuves utilisées.
En mode double faisceau, laisser toujours la même cuve en référence, sans changer sa
position sur le support. Les blancs de cuve sont mesurés une fois avec chaque série
d'analyses. Vérifier que les blancs de cuve sont inchangés lorsque l'acétone est
acidifiée. Si ce n'est pas le cas, en tenir compte dans les calculs.
Le blanc de turbidité (B) de l'échantillon résulte de fines particules, de fibres du
filtre mal centrifugées ou de colloïdes éventuels. On mesure le blanc de turbidité de
chaque échantillon à la longueur d'onde de 750nm à laquelle les pigments n'absorbent
pas : on obtient :le blanc brut Brut.
Le blanc net de turbidité est obtenu en soustrayant le blanc des cuves : B = Brut -
bc750.
Ce blanc doit être inférieur à 0,005 unité d'absorbance par centimètre de trajet optique.
Contrôler la stabilité du blanc de turbidité entre le début et la fin des mesures sur un
échantillon : sa décroissance traduit la présence de particules et, par conséquent, des
mesures d'absorbance erronées. Si le blanc est trop élevé ou varie en cours de mesure,
améliorer les conditions de centrifugation ou de transfert de l'extrait.
Chlorophylle A
Ca=27*[(Ao 665-Ao 750)-(Aa 665-Aa 750)]*(v/(L*/V)
Ou :
Ao 665 & Ao750 = Absorbances à 665 et 750 nm avant acidification.
Aa 665 & Aa750 = Absorbances à 665 et 750 nm après acidification.