Matériel et méthodes
21
La gamme d’étalonnage :
Préparation d'acide Gallique :
2mg d'Acide Gallique + 10 ml éthanol.
On dilue la solution standardisé d'acide Gallique de manière à avoir les Concentrations suivante :
2/1/0.5/0.25/0.12/0.06/0.03/0.01 mg/ml (figure II.7)
On prendre 0.5ml de chacune de ces solutions dans 5ml d'eau distillé.
On ajoute 1ml de Réactif de Folin dilué 10 fois (1ml de folin /9ml d’eau) et on laisse
reposer.
On ajoute ensuite 0.8 ml de la solution saturée de Na2CO3 à 7.5% (7.5 g /100 ml)
La couleur bleu commence à apparaître. Après 2h du Temps.
On mesure l’absorbance de ces solutions avec un spectrophotomètre UV à 765nm.
Figure II.7: la gamme d’étalonnage d’acide gallique
Matériel et méthodes
22
Mode opératoire du dosage des polyphénols
Dans un 20 tube à essai on introduit :
- 0.2 ml d'extrait et on ajoute 5 ml d’eau.
- On ajoute 1 ml du réactif de Folin- Ciocalteu fraîchement préparé (10 fois dilué :1ml de folin /
9ml d’eau).
-On ajoute 0.8 ml de la solution de Na2Co3 à 7.5% (7.5g dans 100 ml).
- L'ensemble est incubé à une température ambiante pendant deux heures (figure II.8).
- La lecture est effectuée contre un blanc sans extrait à l'aide d'un spectrophotomètre à 765nm.
Figure II.8 : l’incubation du 20 échantillons
4. Analyses statistiques
Les résultats ont été exprimés en moyenne ± écart-type (SD) à l'aide du logiciel Graph padPrism
8. Les analyses statistiques ont été effectuées par analyse de variance à un seul critère de
classification (ANOVA One-way). La variable est les espèces (V1 / V2/ B1/ B2/ R), le facteur de
variabilité est le solvant (Ethanol, Méthanol, Acétone et l’eau).
Le test de Tukey a été réalisé et la différence significative a été détectée à p <0,05.
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La gamme d’étalonnage :
Préparation d'acide Gallique :
2mg d'Acide Gallique + 10 ml éthanol.
On dilue la solution standardisé d'acide Gallique de manière à avoir les Concentrations suivante :
2/1/0.5/0.25/0.12/0.06/0.03/0.01 mg/ml (figure II.7)
On prendre 0.5ml de chacune de ces solutions dans 5ml d'eau distillé.
On ajoute 1ml de Réactif de Folin dilué 10 fois (1ml de folin /9ml d’eau) et on laisse
reposer.
On ajoute ensuite 0.8 ml de la solution saturée de Na2CO3 à 7.5% (7.5 g /100 ml)
La couleur bleu commence à apparaître. Après 2h du Temps.
On mesure l’absorbance de ces solutions avec un spectrophotomètre UV à 765nm.
Figure II.7: la gamme d’étalonnage d’acide gallique
Matériel et méthodes
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Mode opératoire du dosage des polyphénols
Dans un 20 tube à essai on introduit :
- 0.2 ml d'extrait et on ajoute 5 ml d’eau.
- On ajoute 1 ml du réactif de Folin- Ciocalteu fraîchement préparé (10 fois dilué :1ml de folin /
9ml d’eau).
-On ajoute 0.8 ml de la solution de Na2Co3 à 7.5% (7.5g dans 100 ml).
- L'ensemble est incubé à une température ambiante pendant deux heures (figure II.8).
- La lecture est effectuée contre un blanc sans extrait à l'aide d'un spectrophotomètre à 765nm.
Figure II.8 : l’incubation du 20 échantillons
4. Analyses statistiques
Les résultats ont été exprimés en moyenne ± écart-type (SD) à l'aide du logiciel Graph padPrism
8. Les analyses statistiques ont été effectuées par analyse de variance à un seul critère de
classification (ANOVA One-way). La variable est les espèces (V1 / V2/ B1/ B2/ R), le facteur de
variabilité est le solvant (Ethanol, Méthanol, Acétone et l’eau).
Le test de Tukey a été réalisé et la différence significative a été détectée à p <0,05.