Matériel et méthodes
19
Figure II.3 : séchage des algues à l’air libre
Les échantillons d’algues sont hachés grossièrement puis broyés finement à l’aide d’un moulin à
café (figure II.4). La poudre obtenue est passée au tamis (figure II.5) et conservée dans des
flacons opaques pour servir aux différentes analyses.
Figure II.4 : broyage des algues
Figure II .5 : tamisage de la poudre
2.2. Etude biochimique
2.2.1. Détermination du taux de polyphénols
2.2.1.1 .Mode opératoire et extraction
Extraction par décoction :
L’extraction des polyphénols par décoction a été effectuée selon le protocole décrit par
CHAVANE et al., 2001:
Matériel et méthodes
20
1 g de la poudre d’algue (B1, B2, V1, V2 et R) sont ajoutés à 40 ml de solvant d’extraction
(éthanol, acétone, méthanol et eau). Chaque mélange est porté à ébullition dans un bain Marie
durant 30 min puis filtré sur un papier filtre (figure II.6), et centrifugés à 4000 tr/min pendant 20
min. Ils sont ensuite conservés à 4 °C jusqu’à utilisation. (MAHMOUDI et al., 2012)
Le dosage des polyphénols totaux
Figure II.6 : la filtration des échantillons
Principe :
Dans le but de déterminer la teneur en polyphénols totaux de nos échantillons, un dosage par la
méthode spectrophotométrique de Folin-Ciocalteu a été effectué. C’est un test largement
pratiqué dans les laboratoires de recherche.
Ce dosage est fondé sur la quantification de la concentration totale de groupements hydroxyles
présents dans l'extrait. Le réactif de Folin - Cicalteu et une solution jaune acide contenant un
complexe polymérique d'ions (hétéro polyacides). En milieu alcalin, le réactif de Folin - Cicalteu
oxyde les phénols en ions phénolates et réduit partiellement ses hétéro polyacides d'où la
formation d'un complexe bleu (DAELS ., 1999).
Avant de passer à la détermination de la teneur en polyphénols totaux nous avons établi une
courbe d’étalonnage en utilisant l’acide gallique comme standard.
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Figure II.3 : séchage des algues à l’air libre
Les échantillons d’algues sont hachés grossièrement puis broyés finement à l’aide d’un moulin à
café (figure II.4). La poudre obtenue est passée au tamis (figure II.5) et conservée dans des
flacons opaques pour servir aux différentes analyses.
Figure II.4 : broyage des algues
Figure II .5 : tamisage de la poudre
2.2. Etude biochimique
2.2.1. Détermination du taux de polyphénols
2.2.1.1 .Mode opératoire et extraction
Extraction par décoction :
L’extraction des polyphénols par décoction a été effectuée selon le protocole décrit par
CHAVANE et al., 2001:
Matériel et méthodes
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1 g de la poudre d’algue (B1, B2, V1, V2 et R) sont ajoutés à 40 ml de solvant d’extraction
(éthanol, acétone, méthanol et eau). Chaque mélange est porté à ébullition dans un bain Marie
durant 30 min puis filtré sur un papier filtre (figure II.6), et centrifugés à 4000 tr/min pendant 20
min. Ils sont ensuite conservés à 4 °C jusqu’à utilisation. (MAHMOUDI et al., 2012)
Le dosage des polyphénols totaux
Figure II.6 : la filtration des échantillons
Principe :
Dans le but de déterminer la teneur en polyphénols totaux de nos échantillons, un dosage par la
méthode spectrophotométrique de Folin-Ciocalteu a été effectué. C’est un test largement
pratiqué dans les laboratoires de recherche.
Ce dosage est fondé sur la quantification de la concentration totale de groupements hydroxyles
présents dans l'extrait. Le réactif de Folin - Cicalteu et une solution jaune acide contenant un
complexe polymérique d'ions (hétéro polyacides). En milieu alcalin, le réactif de Folin - Cicalteu
oxyde les phénols en ions phénolates et réduit partiellement ses hétéro polyacides d'où la
formation d'un complexe bleu (DAELS ., 1999).
Avant de passer à la détermination de la teneur en polyphénols totaux nous avons établi une
courbe d’étalonnage en utilisant l’acide gallique comme standard.