Chapitre III
Matériel et méthodes
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2.5.4. Mode opératoire
a) Filtration et conservation
Dès le retour au laboratoire, nous avons :
- filtré chaque échantillon;
- ajouté quelques gouttes de carbonate de magnésium MgCO3
- pour le conserver plus
longtemps;
- plié en quatre et enrobé dans du papier aluminium préalablement étiqueté.
- puis congelé pour une analyse ultérieure.
b) Extraction des pigments
Afin d'extraire les pigments de chlorophylle-a, nous avons :
- enveloppé les tubes à centrifuger dans une feuille d’aluminium;
- introduit les filtres à centrifuger dans un tube et ajouté 10 ml d’acétone à 90%;
- déchiqueté le filtre à l’aide d’une baguette ou d’un tube de verre, bouché et agité
pour disperser les fibres.
- laissé l’extraction se poursuivre 24h au réfrigérateur dans l’acétone.
- laissé refroidir à température ambiante.
- centrifuger 1 min, pour faire tomber les fibres de verres.
- centrifuger à nouveau 5 à 10 min a 3000-4000 tr/min (les tubes doivent rester boucher
pour éviter l’évaporation).
c) Mesure d’absorbance : Méthode de LORENZEN
Cette méthode consiste à :
- transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve spectrophotomètre ;
- mesurer les absorbance brutes des extraits non acidifier aux longueurs d’onde de 665 et
750 nm sois Abna 665 et Abna 750 ;
- acidifier par addition de 10 μl d HCl 0.3 mol/l par millilitre d’extrait (soit une goutes)
directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min ;
- mesurer les absorbance brutes des extraits acidifié à 665 et 750 nm soit Aba 665 et
Aba750.