lll
tampo'nné de départ à pH 2,5 et
par V; ml de
tampon :in ,
a _—àlors échange des cations”Nà® par
@
,
LYS® et
MET©L
,
'ai
.: «*
'
,
;-.,î' … .*
'
@ : élutîon par V; m1 d’un milieu tamponné à pHÆO (ce
com- ’ ‘
pris entre les pHi” de ASP'ïët “däMET) £%À’sP© :deÿient ASP
6 et
_
placé et remplacé-par les ions NaQ-du,—milieu. '
'
“
éluti0 par V3ml
àpH
(pH Compris
entre les pHi de LYS et de
devient
‘
@ :“ëlût‘îbh” parV4mldunmleutamponne Ÿà‘”H' 1056 (pH
entre les pHi de LYS
:LYS® devient LYS® et
à pH
(pH supérieur
au pHi:de
:?
s
—
—
’
"
"
"
=nëmärgue‘e
de “ce fdît
n d ’ëlutïon püisï
que tous les groupements sulfone's sont neutralisê5
Les
fs_ontsrecueillis'"au.bas ne =lacolonne par fractions égales (de «v» ?
ml) et numérotées de [Ü à. . On fait réagir la ninhydrînesur chacune deces ‘fractions et on
dedîabs_orption
(D. O.)aà la longueur d’onde de 570 nm.
Sur un graet cela _pennet de mesurer]la_ quantite de" chaque acide“
oz-.aminé‘ présent dans le mélange (quantitéqui est proportionnelle à l’intensité
de la coloration par la ninhydfiè et donc àla DD.) et d’identier ces
acides
a—aminés” par leur ordre de sortie qui est
valeurs des pH des
milieux tamponnés utilisés (dont le gradient de pH est croissant dans notre
l?ekerçice
de sortie est le suivant :
ASP,_MET, LYS puis ARG,_
;
«
.Nous avons vu*®ele—Caïàètèr‘e amphotère des acides a-ar'ninés se traduit dans la pratique
fait que ces acides a—aminés, placés dans un mi—
°
lieu
ionisés. Placés dans un champ élecVers
à des vitesses différentes dépendant
'
de la
qu?ils portentîà ce pH.
Poursavon quelle
chacun des acides a-aminés donnés, il faut
répondre à chaque fois à la question : «le pH du milieu est-il plus acide (ou