138 Les biomarqueurs moléculaires en oncologie
Principe du test
Le test détecte l’amplification d’un seul gène, la CK19, ce marqueur a été
sélectionné parmi un panel de 55 gènes. L’ARNm CK19 a été choisi car ce
marqueur est exprimé à un taux élevé dans les cellules tumorales mammaires
par rapport aux cellules mammaires normales. Il est très faiblement détecté
dans les ganglions lymphatiques normaux et son niveau d’expression est
proportionnel au nombre de cellules tumorales [27].
La préparation des ganglions pour l’analyse est simple, il n’y a pas d’extraction
des acides nucléiques. Le ganglion est broyé, le lysat est centrifugé, une amplification par RT LAMP de l’ARNm de la CK19 est réalisée sur le surnageant
du lysat sur un automate, le RD100i (fig. 3).
Fig. 3 – Schéma de la procédure simplifiée OSNA.
Les études de validation ont été menées de la même façon que pour le test
GeneSearch™ BLN, à savoir une partition du ganglion en quatre fragments
répartis alternativement entre une analyse histologique définitive et la technique OSNA. Pour l’utilisation en routine, les préconisations du fournisseur
laissent à l’utilisateur le choix de broyer tout le ganglion ou de garder une
tranche centrale pour une analyse histologique. Les pratiques tendent à s’harmoniser entre les différents utilisateurs pour mettre tout le ganglion dans l’analyse OSNA. Le problème d’une sous-expression dans certains cas de la CK19
et donc de faux négatifs avec la technique OSNA a justifié pour certains la
conservation d’une tranche centrale, pour d’autres la réalisation d’une étude
systématique de l’expression de la CK19 par immunohistochimie sur la
biopsie tumorale, avant la réalisation d’un test OSNA. Le test OSNA était
initialement en concurrence avec le test GeneSearch™ BLN et se distinguait
de celui-ci par la technologie d’amplification moléculaire, mais aussi par le
choix d’un seul marqueur, la CK19 spécifique des cellules épithéliales, alors
que l’analyse GeneSearch™ BLN ajoutait un second marqueur spécifique des
cellules mammaires, la mammaglobine. L’intérêt de ce deuxième marqueur n’a
jamais été clairement démontré, car sa sensibilité est moins bonne pour la
détection des cellules tumorales mammaires que celle de la CK19 et donc,
Principe du test
Le test détecte l’amplification d’un seul gène, la CK19, ce marqueur a été
sélectionné parmi un panel de 55 gènes. L’ARNm CK19 a été choisi car ce
marqueur est exprimé à un taux élevé dans les cellules tumorales mammaires
par rapport aux cellules mammaires normales. Il est très faiblement détecté
dans les ganglions lymphatiques normaux et son niveau d’expression est
proportionnel au nombre de cellules tumorales [27].
La préparation des ganglions pour l’analyse est simple, il n’y a pas d’extraction
des acides nucléiques. Le ganglion est broyé, le lysat est centrifugé, une amplification par RT LAMP de l’ARNm de la CK19 est réalisée sur le surnageant
du lysat sur un automate, le RD100i (fig. 3).
Fig. 3 – Schéma de la procédure simplifiée OSNA.
Les études de validation ont été menées de la même façon que pour le test
GeneSearch™ BLN, à savoir une partition du ganglion en quatre fragments
répartis alternativement entre une analyse histologique définitive et la technique OSNA. Pour l’utilisation en routine, les préconisations du fournisseur
laissent à l’utilisateur le choix de broyer tout le ganglion ou de garder une
tranche centrale pour une analyse histologique. Les pratiques tendent à s’harmoniser entre les différents utilisateurs pour mettre tout le ganglion dans l’analyse OSNA. Le problème d’une sous-expression dans certains cas de la CK19
et donc de faux négatifs avec la technique OSNA a justifié pour certains la
conservation d’une tranche centrale, pour d’autres la réalisation d’une étude
systématique de l’expression de la CK19 par immunohistochimie sur la
biopsie tumorale, avant la réalisation d’un test OSNA. Le test OSNA était
initialement en concurrence avec le test GeneSearch™ BLN et se distinguait
de celui-ci par la technologie d’amplification moléculaire, mais aussi par le
choix d’un seul marqueur, la CK19 spécifique des cellules épithéliales, alors
que l’analyse GeneSearch™ BLN ajoutait un second marqueur spécifique des
cellules mammaires, la mammaglobine. L’intérêt de ce deuxième marqueur n’a
jamais été clairement démontré, car sa sensibilité est moins bonne pour la
détection des cellules tumorales mammaires que celle de la CK19 et donc,