134 Les biomarqueurs moléculaires en oncologie
pas des tests diagnostiques validés. La réalisation d’un lysat ganglionnaire suivi
d’une extraction d’ARN puis d’une amplification par RT PCR nécessite une
journée de manipulation, « ces tests maison » ne sont pas réalisables en extemporané, les ganglions sont congelés puis analysés. Ainsi de nombreuses publications rapportent les résultats d’analyses réalisées par RT PCR pour rechercher les
métastases ganglionnaires dans les cancers du sein [7-12], dans les tumeurs des
voies aérodigestives supérieures [13-15], dans les tumeurs gastriques [16], dans
les tumeurs coliques [17, 18], dans les mélanomes [19].
L’AJCC [20] a revu en 2002 le système de classification pour le cancer du sein
en incluant la mention de techniques moléculaires utilisées pour la détection
de métastases ganglionnaires correspondant à une classification pN0(mol+).
Deux firmes ont investi pour le développement d’une technique moléculaire
rapide réalisable en extemporané pour le dépistage des métastases ganglionnaires dans le cancer du sein : Veridex, société américaine filiale de Johnson
et Johnson, avec GeneSearch™ BLN et Sysmex, société japonaise, avec OSNA
(One Step Nucleic Acid Amplification).
La validation des analyses moléculaires est complexe car ces analyses ne sont
réalisées que sur du lysat de ganglion frais ou congelé et, pour comparer le
résultat de l’analyse moléculaire à celui de l’analyse histologique conventionnelle (technique de référence), le ganglion doit être partagé et analysé en parts
égales avec les deux techniques. Le partage doit se faire selon des tranches
alternées afin de minimiser les biais de localisation. Mais, même en respectant
un partage alterné et équitable, on ne peut pas s’affranchir complètement de
ces biais puisque ce qui est analysé en histologie ne peut pas être analysé par
une technique moléculaire (fig. 1).
Technique GeneSearch™ BLN
Cette méthode d’analyse moléculaire approuvée CE et ayant le marquage
FDA pour la détection des métastases ganglionnaires dans les ganglions sentinelles de patients opérés de tumeur mammaire n’est plus commercialisée par
la société Veridex depuis fin 2009, mais a fait l’objet de nombreuses études
et publications qui restent très intéressantes et font apparaître les enjeux des
analyses moléculaires.
Principe du test
Le test GeneSearch™ BLN détecte qualitativement l’expression de deux
gènes : la mammaglobine (MG) et la cytokératine 19 (CK19). Cette combinaison de deux marqueurs a été retenue sur les critères publiés par Backus et
al. en 2005 [8]. Ces auteurs ont étudié différents marqueurs par RT PCR et
pas des tests diagnostiques validés. La réalisation d’un lysat ganglionnaire suivi
d’une extraction d’ARN puis d’une amplification par RT PCR nécessite une
journée de manipulation, « ces tests maison » ne sont pas réalisables en extemporané, les ganglions sont congelés puis analysés. Ainsi de nombreuses publications rapportent les résultats d’analyses réalisées par RT PCR pour rechercher les
métastases ganglionnaires dans les cancers du sein [7-12], dans les tumeurs des
voies aérodigestives supérieures [13-15], dans les tumeurs gastriques [16], dans
les tumeurs coliques [17, 18], dans les mélanomes [19].
L’AJCC [20] a revu en 2002 le système de classification pour le cancer du sein
en incluant la mention de techniques moléculaires utilisées pour la détection
de métastases ganglionnaires correspondant à une classification pN0(mol+).
Deux firmes ont investi pour le développement d’une technique moléculaire
rapide réalisable en extemporané pour le dépistage des métastases ganglionnaires dans le cancer du sein : Veridex, société américaine filiale de Johnson
et Johnson, avec GeneSearch™ BLN et Sysmex, société japonaise, avec OSNA
(One Step Nucleic Acid Amplification).
La validation des analyses moléculaires est complexe car ces analyses ne sont
réalisées que sur du lysat de ganglion frais ou congelé et, pour comparer le
résultat de l’analyse moléculaire à celui de l’analyse histologique conventionnelle (technique de référence), le ganglion doit être partagé et analysé en parts
égales avec les deux techniques. Le partage doit se faire selon des tranches
alternées afin de minimiser les biais de localisation. Mais, même en respectant
un partage alterné et équitable, on ne peut pas s’affranchir complètement de
ces biais puisque ce qui est analysé en histologie ne peut pas être analysé par
une technique moléculaire (fig. 1).
Technique GeneSearch™ BLN
Cette méthode d’analyse moléculaire approuvée CE et ayant le marquage
FDA pour la détection des métastases ganglionnaires dans les ganglions sentinelles de patients opérés de tumeur mammaire n’est plus commercialisée par
la société Veridex depuis fin 2009, mais a fait l’objet de nombreuses études
et publications qui restent très intéressantes et font apparaître les enjeux des
analyses moléculaires.
Principe du test
Le test GeneSearch™ BLN détecte qualitativement l’expression de deux
gènes : la mammaglobine (MG) et la cytokératine 19 (CK19). Cette combinaison de deux marqueurs a été retenue sur les critères publiés par Backus et
al. en 2005 [8]. Ces auteurs ont étudié différents marqueurs par RT PCR et