est augmentée avec le temps (gradient de pH). Les acides aminés du mélange de départ
migrent à des vitesses différentes (en fonction de leurs interactions avec la résine),
occasionnant ainsi leur séparation. À la sortie de la colonne, l’éluant est traité avec de
la ninhydrine an de détecter par ultraviolet les acides aminés (voir la section 6.5.3,
p. 268) et de les isoler séparément. Le signal ultraviolet (absorbance à 595 nm) de
l’éluant est donc enregistré en fonction du temps pour créer un chromatogramme et
montrer ainsi chacun des acides aminés obtenus, avec leurs temps d’élution et leurs
abondances relatives (surface sous les pics). L’appareil est habituellement calibré avec
un mélange connu d’acides aminés, ce qui permet d’identier chaque acide aminé élué
de la colonne d’après son temps d’élution (aussi appelé « temps de rétention »). La
gure 6.26 montre un exemple de chromatogramme pouvant être obtenu après une
séparation d’un mélange d’acides aminés.
Figure 6.26
Chromatogramme montrant
la séparation d’acides aminés
à l’aide d’un système CLHP
(chromatographie en phase
liquide à haute performance,
ou HPLC en anglais). La quantité
de chaque acide aminé est
proportionnelle à la surface
sous les pics.
L’identication des acides aminés par chromatographie ne donne toutefois aucune
indication sur la séquence des résidus dans le peptide ou la protéine de départ. Il faut
donc, à partir de ce point, faire appel à diverses techniques (chimiques et enzymatiques)
pour déterminer cet ordre particulier, ce dont il sera question dans la pro chaine section.
Exemple 6.6
Un tripeptide est formé des acides aminés Ser, Pro et Lys. Combien de séquences
possibles pourraient correspondre à sa formule ?
Solution
Avec trois acides aminés distincts pouvant apparaître à trois positions différentes dans
le tripeptide, un total de six séquences différentes peut être obtenu :
SerOProOLys, SerOLysOPro, ProOSerOLys, ProOLysOSer, LysOSerOPro,
LysOProOSer
Exercice 6.8 Déterminez les séquences possibles pour chacun des peptides
suivants.
a) Tripeptide contenant Val, Val et Leu ;
b) Tétrapeptide contenant Arg, Trp, Ile et Tyr.
276 Chapitre 6 Protides
migrent à des vitesses différentes (en fonction de leurs interactions avec la résine),
occasionnant ainsi leur séparation. À la sortie de la colonne, l’éluant est traité avec de
la ninhydrine an de détecter par ultraviolet les acides aminés (voir la section 6.5.3,
p. 268) et de les isoler séparément. Le signal ultraviolet (absorbance à 595 nm) de
l’éluant est donc enregistré en fonction du temps pour créer un chromatogramme et
montrer ainsi chacun des acides aminés obtenus, avec leurs temps d’élution et leurs
abondances relatives (surface sous les pics). L’appareil est habituellement calibré avec
un mélange connu d’acides aminés, ce qui permet d’identier chaque acide aminé élué
de la colonne d’après son temps d’élution (aussi appelé « temps de rétention »). La
gure 6.26 montre un exemple de chromatogramme pouvant être obtenu après une
séparation d’un mélange d’acides aminés.
Figure 6.26
Chromatogramme montrant
la séparation d’acides aminés
à l’aide d’un système CLHP
(chromatographie en phase
liquide à haute performance,
ou HPLC en anglais). La quantité
de chaque acide aminé est
proportionnelle à la surface
sous les pics.
L’identication des acides aminés par chromatographie ne donne toutefois aucune
indication sur la séquence des résidus dans le peptide ou la protéine de départ. Il faut
donc, à partir de ce point, faire appel à diverses techniques (chimiques et enzymatiques)
pour déterminer cet ordre particulier, ce dont il sera question dans la pro chaine section.
Exemple 6.6
Un tripeptide est formé des acides aminés Ser, Pro et Lys. Combien de séquences
possibles pourraient correspondre à sa formule ?
Solution
Avec trois acides aminés distincts pouvant apparaître à trois positions différentes dans
le tripeptide, un total de six séquences différentes peut être obtenu :
SerOProOLys, SerOLysOPro, ProOSerOLys, ProOLysOSer, LysOSerOPro,
LysOProOSer
Exercice 6.8 Déterminez les séquences possibles pour chacun des peptides
suivants.
a) Tripeptide contenant Val, Val et Leu ;
b) Tétrapeptide contenant Arg, Trp, Ile et Tyr.
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