soit négatives lorsque le pH est plus grand que le pI. La charge effective moyenne d’un
acide aminé varie donc selon le pH (voir le tableau 6.2) et elle est d’autant plus importante que le pH du milieu est différent du pI de l’acide aminé.
Exemple 6.3
Quelle est la charge effective moyenne de la glycine, de l’acide aspartique et de la
lysine au pH physiologique (7,35) ?
Solution
Pour la glycine, 7,35 > pI (5,97), donc charge négative.
Pour l’acide aspartique, 7,35 > pI (2,98), donc charge négative. Cette charge est plus
importante que celle de la glycine, car l’écart entre le pH et le pI est plus important.
Pour la lysine, 7,35 < pI (9,74), donc charge positive.
6.3.3 Séparation des acides aminés par électrophorèse
L’électrophorèse est une technique de séparation basée sur le déplacement de molécules chargées sous l’inuence d’un courant électrique. Étant donné que les acides
aminés peuvent exister sous différentes formes (neutre, cationique ou anionique)
selon un pH donné, cette technique est donc très utile pour séparer les composants
d’un mélange d’acides aminés en vue de leur isolation et de leur identication. Une
solution du mélange à séparer est d’abord appliquée au centre d’un papier-ltre ou
d’un gel déposé sur une plaque. La plaque est ensuite déposée dans une solution ayant
un pH prédéterminé. Les électrodes sont connectées à chaque bout de la plaque, et un
courant électrique est appliqué. Les acides aminés chargés positivement (pH < pI)
migreront alors vers l’électrode négative, tandis que les acides aminés chargés négativement (pH > pI) migreront vers l’électrode positive. Les acides aminés ayant
une charge neutre dans les conditions de pH utilisées ne seront pas affectés par la
différence de potentiel. Les acides aminés migreront donc dans des directions et à
des vitesses différentes selon leurs charges formelles respectives. Les composants du
mélange peuvent ensuite être isolés et identiés à l’aide d’échantillons d’acides aminés authentiques (servant de référence).
La gure 6.10 montre la séparation par électrophorèse d’un mélange de trois acides
aminés (acide aspartique (Asp), glycine (Gly) et lysine (Lys)), à deux pH différents
(5,97 et 12,00). Un trait noir indique un acide aminé de charge nulle, alors qu’un trait
rouge indique un acide aminé de charge effective moyenne négative et un trait bleu, un
acide aminé de charge effective moyenne positive.
Le mélange des trois acides aminés est d’abord déposé au centre du support solide,
le pH de la solution est ajusté à 5,97 et le champ électrique est appliqué. Puisque la
glycine a un pI égal au pH de la solution, la charge effective moyenne est donc nulle
Tableau 6.2
Charge effective
moyenne d’un acide
aminé en fonction du
pH de la solution
pH
Charge
effective
pH < pI
+
pH = pI
0
pH > pI
−
L’électrophorèse est une méthode
de séparation des acides aminés
fondée sur leurs différences de
charge dans une solution aqueuse,
à un pH donné.
Figure 6.10 Séparation d’un mélange de trois acides aminés
(acide aspartique, glycine et lysine) par électrophorèse – a) Mélange avant séparation ;
b) Séparation à pH 5,97 ; c) Séparation à pH 12,00
6.3 Caractère dipolaire et point isoélectrique des acides aminés
263
acide aminé varie donc selon le pH (voir le tableau 6.2) et elle est d’autant plus importante que le pH du milieu est différent du pI de l’acide aminé.
Exemple 6.3
Quelle est la charge effective moyenne de la glycine, de l’acide aspartique et de la
lysine au pH physiologique (7,35) ?
Solution
Pour la glycine, 7,35 > pI (5,97), donc charge négative.
Pour l’acide aspartique, 7,35 > pI (2,98), donc charge négative. Cette charge est plus
importante que celle de la glycine, car l’écart entre le pH et le pI est plus important.
Pour la lysine, 7,35 < pI (9,74), donc charge positive.
6.3.3 Séparation des acides aminés par électrophorèse
L’électrophorèse est une technique de séparation basée sur le déplacement de molécules chargées sous l’inuence d’un courant électrique. Étant donné que les acides
aminés peuvent exister sous différentes formes (neutre, cationique ou anionique)
selon un pH donné, cette technique est donc très utile pour séparer les composants
d’un mélange d’acides aminés en vue de leur isolation et de leur identication. Une
solution du mélange à séparer est d’abord appliquée au centre d’un papier-ltre ou
d’un gel déposé sur une plaque. La plaque est ensuite déposée dans une solution ayant
un pH prédéterminé. Les électrodes sont connectées à chaque bout de la plaque, et un
courant électrique est appliqué. Les acides aminés chargés positivement (pH < pI)
migreront alors vers l’électrode négative, tandis que les acides aminés chargés négativement (pH > pI) migreront vers l’électrode positive. Les acides aminés ayant
une charge neutre dans les conditions de pH utilisées ne seront pas affectés par la
différence de potentiel. Les acides aminés migreront donc dans des directions et à
des vitesses différentes selon leurs charges formelles respectives. Les composants du
mélange peuvent ensuite être isolés et identiés à l’aide d’échantillons d’acides aminés authentiques (servant de référence).
La gure 6.10 montre la séparation par électrophorèse d’un mélange de trois acides
aminés (acide aspartique (Asp), glycine (Gly) et lysine (Lys)), à deux pH différents
(5,97 et 12,00). Un trait noir indique un acide aminé de charge nulle, alors qu’un trait
rouge indique un acide aminé de charge effective moyenne négative et un trait bleu, un
acide aminé de charge effective moyenne positive.
Le mélange des trois acides aminés est d’abord déposé au centre du support solide,
le pH de la solution est ajusté à 5,97 et le champ électrique est appliqué. Puisque la
glycine a un pI égal au pH de la solution, la charge effective moyenne est donc nulle
Tableau 6.2
Charge effective
moyenne d’un acide
aminé en fonction du
pH de la solution
pH
Charge
effective
pH < pI
+
pH = pI
0
pH > pI
−
L’électrophorèse est une méthode
de séparation des acides aminés
fondée sur leurs différences de
charge dans une solution aqueuse,
à un pH donné.
Figure 6.10 Séparation d’un mélange de trois acides aminés
(acide aspartique, glycine et lysine) par électrophorèse – a) Mélange avant séparation ;
b) Séparation à pH 5,97 ; c) Séparation à pH 12,00
6.3 Caractère dipolaire et point isoélectrique des acides aminés
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