38
Préparation des réactifs pour le dosage :
Solution A : Préparez une solution de carbonate de sodium (2%) dans NaOH (0.1 N).
Solution B : Préparez une solution de sulfate de cuivre (0.5%) dans un mélange de
tartrate double de sodium et potassium (1%).
Solution C : Mélangez les solutions A et B dans un rapport de 50 :1.
Solution D : Diluez le réactif de Folin au 1/2.
• Analyse :
Pour préparer l’échantillon, mélangez 1 ml de celui-ci avec 5 ml de la solution C. Agitez le
mélange et laissez-le reposer à température ambiante pendant 10 minutes. Ajoutez ensuite 0,5
ml de réactif de Folin et agitez à nouveau. Incubez le mélange à l’obscurité pendant 30 minutes,
puis laissez la réaction colorée se développer à l’obscurité pendant 30 minutes supplémentaires.
Enfin, mesurez l’absorbance à 650 nm. Une courbe d’étalonnage est créée à partir d’une
solution de sérum albumine bovine (BSA) avec des concentrations allant de 0 à 500 µg/ml.
C. Dosage de protéines des extraits
La teneur en protéines totales a été déterminée en mesurant l'azote total selon la méthode de
Kjeldahl, comme décrite par les normes (Afnor ,1985). L'essai a été répété trois fois avec un
seul blanc.
Le protocole commence par la minéralisation de l'échantillon. Pour ce faire, 0,5 g de
l'échantillon (farine, gélatine, hydrolysat protéique) est introduit dans un matras de 250 ml,
auquel on ajoute 2 g d'un mélange catalyseur (25 g de sulfate de potassium, 25 g de sulfate de
calcium et 0,5 g de sélénium) et 20 ml d'acide sulfurique pur. Le matras est ensuite placé sur un
support chauffant et chauffé jusqu'à ce que le liquide devienne clair avec une coloration verte
stable, indiquant la fin de la minéralisation. Après refroidissement, environ 200 ml d'eau
distillée sont ajoutés lentement, tout en agitant et en refroidissant sous un courant d'eau, pour
diluer le mélange. L'agitateur est rincé, et le volume est ajusté au trait de jauge avec de l'eau
distillée.
Pour la distillation, 50 ml du contenu du matras sont transférés dans un appareil de distillation.
On y ajoute lentement 50 ml de lessive de soude (densité 1,33) dans le ballon de l'appareil. Dans
un bécher destiné à recueillir le distillat, on introduit 20 ml d'une solution indicatrice composée
de 2 g d'acide borique, 20 ml d'éthanol absolu et 1 ml d'un mélange d'indicateurs colorés.
L'appareil est mis en marche, et la distillation est poursuivie jusqu'à obtenir 100 ml de distillat,
en s'assurant que l'extrémité inférieure de la colonne réfrigérante est immergée dans la solution
d'acide borique pour éviter les pertes.
Préparation des réactifs pour le dosage :
Solution A : Préparez une solution de carbonate de sodium (2%) dans NaOH (0.1 N).
Solution B : Préparez une solution de sulfate de cuivre (0.5%) dans un mélange de
tartrate double de sodium et potassium (1%).
Solution C : Mélangez les solutions A et B dans un rapport de 50 :1.
Solution D : Diluez le réactif de Folin au 1/2.
• Analyse :
Pour préparer l’échantillon, mélangez 1 ml de celui-ci avec 5 ml de la solution C. Agitez le
mélange et laissez-le reposer à température ambiante pendant 10 minutes. Ajoutez ensuite 0,5
ml de réactif de Folin et agitez à nouveau. Incubez le mélange à l’obscurité pendant 30 minutes,
puis laissez la réaction colorée se développer à l’obscurité pendant 30 minutes supplémentaires.
Enfin, mesurez l’absorbance à 650 nm. Une courbe d’étalonnage est créée à partir d’une
solution de sérum albumine bovine (BSA) avec des concentrations allant de 0 à 500 µg/ml.
C. Dosage de protéines des extraits
La teneur en protéines totales a été déterminée en mesurant l'azote total selon la méthode de
Kjeldahl, comme décrite par les normes (Afnor ,1985). L'essai a été répété trois fois avec un
seul blanc.
Le protocole commence par la minéralisation de l'échantillon. Pour ce faire, 0,5 g de
l'échantillon (farine, gélatine, hydrolysat protéique) est introduit dans un matras de 250 ml,
auquel on ajoute 2 g d'un mélange catalyseur (25 g de sulfate de potassium, 25 g de sulfate de
calcium et 0,5 g de sélénium) et 20 ml d'acide sulfurique pur. Le matras est ensuite placé sur un
support chauffant et chauffé jusqu'à ce que le liquide devienne clair avec une coloration verte
stable, indiquant la fin de la minéralisation. Après refroidissement, environ 200 ml d'eau
distillée sont ajoutés lentement, tout en agitant et en refroidissant sous un courant d'eau, pour
diluer le mélange. L'agitateur est rincé, et le volume est ajusté au trait de jauge avec de l'eau
distillée.
Pour la distillation, 50 ml du contenu du matras sont transférés dans un appareil de distillation.
On y ajoute lentement 50 ml de lessive de soude (densité 1,33) dans le ballon de l'appareil. Dans
un bécher destiné à recueillir le distillat, on introduit 20 ml d'une solution indicatrice composée
de 2 g d'acide borique, 20 ml d'éthanol absolu et 1 ml d'un mélange d'indicateurs colorés.
L'appareil est mis en marche, et la distillation est poursuivie jusqu'à obtenir 100 ml de distillat,
en s'assurant que l'extrémité inférieure de la colonne réfrigérante est immergée dans la solution
d'acide borique pour éviter les pertes.