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1.29.3. Evaluation des propriétés antibactériennes des hydrogels
Bien que les propriétés antibactériennes du chitosane soient largement documentées dans la
littérature du fait de ses nombreuses applications dans les domaines pharmaceutique,
agro−alimentaire et biomédical, le plus souvent les études sont conduites en solution, et donc dans
des conditions de pH acide. Il est donc délicat de savoir si l’activité antibactérienne observée
est−elle due au chitosane lui−même ou à l’acidité du milieu. Pourtant il s’agit là d’une information
de grande importance dans le cadre du développement d’un dispositif cicatrisant pour le soin des
brûlures. En effet les brulés sont des patients susceptibles d’être très rapidement infectés et de
façon massive du fait de la disparition de la couverture cutanée jouant un rôle essentiel de barrière,
et aussi du fait de l’immunodépression sévère qui se développe.[32].
Il nous est donc apparu important d’évaluer cette activité dans des conditions de pH proches de la
neutralité, conditions dans lesquelles nos hydrogels sont stables.
Les bactéries peuvent être cultivées en milieux liquide et solide. Les milieux liquides sont utilisés
pour la culture de bactéries pures ou lors d’infections microbiennes (culture dans un bouillon
nutritif ou encore à partir du sang d’un patient par exemple, on parle alors d’hémoculture). Les
milieux solides ou semi−solides, à base d’agar (gélose), sont utilisés pour l’isolement et le
comptage. Dans ces milieux sont ajoutés des nutriments favorisant la croissance des bactéries
étudiées.
Afin de procéder à une culture bactérienne en milieu liquide et à pH proche de la neutralité, nous
avons choisi de travailler à partir de broyats d’hydrogels, dispersés dans le milieu de culture. Ainsi
l’effet bactériostatique évalué est celui des dispositifs eux−mêmes.
1.29.3.1. Choix du milieu de culture
Un milieu de culture est composé d'un mélange de substrats nutritifs (acides aminés, peptides,
sucres, etc), d'un système tampon pour éviter les variations importantes du pH, de sels minéraux
et de vitamines. Il est possible d'ajouter des facteurs de croissance.
Le milieu de culture qui a été choisi est le bouillon de culture Brain−Heart. Il s’agit d’un bouillon
d’usage courant qui convient à la culture de germes exigeants. Il est composé principalement
d’infusion de cervelle de veau (12.5 g.L−1), d’infusion de cœur de bœuf (5.0g.L−1), de
protéose−peptone (10.0g.L−1), de glucose (2.0 g.L−1), de chlorure de sodium (5.0g.L−1), de
phosphate disodique (2.5 g.L−1) et d’eau. Le pH du milieu est de 7.4 (+/− 0.2).
1.29.3. Evaluation des propriétés antibactériennes des hydrogels
Bien que les propriétés antibactériennes du chitosane soient largement documentées dans la
littérature du fait de ses nombreuses applications dans les domaines pharmaceutique,
agro−alimentaire et biomédical, le plus souvent les études sont conduites en solution, et donc dans
des conditions de pH acide. Il est donc délicat de savoir si l’activité antibactérienne observée
est−elle due au chitosane lui−même ou à l’acidité du milieu. Pourtant il s’agit là d’une information
de grande importance dans le cadre du développement d’un dispositif cicatrisant pour le soin des
brûlures. En effet les brulés sont des patients susceptibles d’être très rapidement infectés et de
façon massive du fait de la disparition de la couverture cutanée jouant un rôle essentiel de barrière,
et aussi du fait de l’immunodépression sévère qui se développe.[32].
Il nous est donc apparu important d’évaluer cette activité dans des conditions de pH proches de la
neutralité, conditions dans lesquelles nos hydrogels sont stables.
Les bactéries peuvent être cultivées en milieux liquide et solide. Les milieux liquides sont utilisés
pour la culture de bactéries pures ou lors d’infections microbiennes (culture dans un bouillon
nutritif ou encore à partir du sang d’un patient par exemple, on parle alors d’hémoculture). Les
milieux solides ou semi−solides, à base d’agar (gélose), sont utilisés pour l’isolement et le
comptage. Dans ces milieux sont ajoutés des nutriments favorisant la croissance des bactéries
étudiées.
Afin de procéder à une culture bactérienne en milieu liquide et à pH proche de la neutralité, nous
avons choisi de travailler à partir de broyats d’hydrogels, dispersés dans le milieu de culture. Ainsi
l’effet bactériostatique évalué est celui des dispositifs eux−mêmes.
1.29.3.1. Choix du milieu de culture
Un milieu de culture est composé d'un mélange de substrats nutritifs (acides aminés, peptides,
sucres, etc), d'un système tampon pour éviter les variations importantes du pH, de sels minéraux
et de vitamines. Il est possible d'ajouter des facteurs de croissance.
Le milieu de culture qui a été choisi est le bouillon de culture Brain−Heart. Il s’agit d’un bouillon
d’usage courant qui convient à la culture de germes exigeants. Il est composé principalement
d’infusion de cervelle de veau (12.5 g.L−1), d’infusion de cœur de bœuf (5.0g.L−1), de
protéose−peptone (10.0g.L−1), de glucose (2.0 g.L−1), de chlorure de sodium (5.0g.L−1), de
phosphate disodique (2.5 g.L−1) et d’eau. Le pH du milieu est de 7.4 (+/− 0.2).