CHAPITRE II
Matériel & Méthodes
— Le pourcentage de l’inoculum,
— Le pH du milieu
— La concentration initiale du chrome.
II.8.1 Expérimentation réalisée
Afin de mettre en évidence l’effet des trois paramètres cités ci-dessus, des flacons de 150 ml de
bouillon nutritif contenant des concentrations de 100 mg/l et 200 mg/l de Chrome VI, ajustés à des
pH variés (pH 5, pH 7 et pH 9), ont été inoculés avec des proportions d’inoculum jeune de 1%,
5% et 10% du volume total. En parallèle, des flacons témoins ont été préparés dans les mêmes
conditions, mais sans Chrome VI. Le milieu est ensuite incubé à 37°C pendant 120 heures.
Pour chaque flacon, un échantillon de 10 ml est prélevé dans des conditions d’asepsie à des intervalles de temps régulières (t0, t6, t24, t48, t72, t96, t120), la cinétique de la croissance bactérienne
a été suivie par la mesure de l’absorbance à 600 nm ainsi que la concentration du Chrome VI à 540
nm.
II.8.2 Dosage du Chrome VI par la méthode colorimétrique
Les échantillons de 10 ml prélevés sont centrifugés à 6000 rpm pendant 10 min afin d’obtenir un
surnageant exempt de cellules microbiennes (Amrik et Anshu, 2013). Prélever 5ml du surnageant,
ajouter 4ml d’acide sulfurique 2N et 0,20 ml de solution de 1,5-diphenycarbazide.
Le Cr (VI) de l’échantillon à analyser est mélangé avec un agent complexant, le 1,5-diphenycarbazide
en milieu acide. Ainsi, un complexe rose violacé se forme après 10 à 15 minutes, et son intensité
est mesurée par spectrophotométrie à 540 nm (Mahjoub et al., 2015 ; Carlos et al., 2016).
La détermination de la concentration du chrome se fait à l’aide d’une courbe d’étalonnage établie
préalablement pour différentes concentrations de chrome hexavalent (voir en annexe) (APHA,2005 ;
CENTRED’EXPERTISE Québec, 2006) Le taux de réduction du chrome (Tr) est calculé en utilisant la formule suivante (Pang et al.,2011) :
T r =
(C0 − Ct)
C0
∗ 100
(II.2)
C0 : concentration initiale du Cr (VI)
Ct : concentration du Cr (VI) en temps t
t : temps d’incubation.
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Matériel & Méthodes
— Le pourcentage de l’inoculum,
— Le pH du milieu
— La concentration initiale du chrome.
II.8.1 Expérimentation réalisée
Afin de mettre en évidence l’effet des trois paramètres cités ci-dessus, des flacons de 150 ml de
bouillon nutritif contenant des concentrations de 100 mg/l et 200 mg/l de Chrome VI, ajustés à des
pH variés (pH 5, pH 7 et pH 9), ont été inoculés avec des proportions d’inoculum jeune de 1%,
5% et 10% du volume total. En parallèle, des flacons témoins ont été préparés dans les mêmes
conditions, mais sans Chrome VI. Le milieu est ensuite incubé à 37°C pendant 120 heures.
Pour chaque flacon, un échantillon de 10 ml est prélevé dans des conditions d’asepsie à des intervalles de temps régulières (t0, t6, t24, t48, t72, t96, t120), la cinétique de la croissance bactérienne
a été suivie par la mesure de l’absorbance à 600 nm ainsi que la concentration du Chrome VI à 540
nm.
II.8.2 Dosage du Chrome VI par la méthode colorimétrique
Les échantillons de 10 ml prélevés sont centrifugés à 6000 rpm pendant 10 min afin d’obtenir un
surnageant exempt de cellules microbiennes (Amrik et Anshu, 2013). Prélever 5ml du surnageant,
ajouter 4ml d’acide sulfurique 2N et 0,20 ml de solution de 1,5-diphenycarbazide.
Le Cr (VI) de l’échantillon à analyser est mélangé avec un agent complexant, le 1,5-diphenycarbazide
en milieu acide. Ainsi, un complexe rose violacé se forme après 10 à 15 minutes, et son intensité
est mesurée par spectrophotométrie à 540 nm (Mahjoub et al., 2015 ; Carlos et al., 2016).
La détermination de la concentration du chrome se fait à l’aide d’une courbe d’étalonnage établie
préalablement pour différentes concentrations de chrome hexavalent (voir en annexe) (APHA,2005 ;
CENTRED’EXPERTISE Québec, 2006) Le taux de réduction du chrome (Tr) est calculé en utilisant la formule suivante (Pang et al.,2011) :
T r =
(C0 − Ct)
C0
∗ 100
(II.2)
C0 : concentration initiale du Cr (VI)
Ct : concentration du Cr (VI) en temps t
t : temps d’incubation.
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