CHAPITRE II
Matériel & Méthodes
A l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée, ajouter l’inoculum bactérien et une goutte d’eau
oxygénée. Un test positif qui indique la présence de catalase est traduit par le dégagement
immédiat de bulles gazeuses.
• Test d’oxydase (Delarras, 2007)
Ce test permet une identification présomptive de certaines bactéries à Gram (-) qui produisent cette enzyme. En présence de cytochrome oxydase, le N,N,N’,N’-Tetramethyl-pphenylenediamine dihydrochloride (incolore) forme un composé coloré en bleu.
A l’aide de pinces placer un disque d’oxydase sur une lame porte objet, et humidifier à l’aide
d’une goutte d’eau physiologique stérile. Choisir une colonie bien isolée et représentative de
la culture fraiche à tester. Prélever la colonie choisie à l’aide d’une anse de platine. Frotter
doucement la colonie sur le disque. Un test positif se traduit par l’apparition d’une coloration
bleu foncée à violette dans un délai de 30 secondes, le test est négatif dans le cas contraire.
• Galerie API20E
Le système API20E (BioMérieux, Inc., France) est conçu pour l’identification des entérobactéries et autres bacilles à Gram négatif. Il se compose de 20 microtubes contenant des
substrats déshydratés, permettant une identification précise des bactéries ciblées. Les tests
sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait selon les recommandations du fournisseur (Figarella, 1998). Le mode opératoire est illustré dans la Fig.II.6.
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Matériel & Méthodes
A l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée, ajouter l’inoculum bactérien et une goutte d’eau
oxygénée. Un test positif qui indique la présence de catalase est traduit par le dégagement
immédiat de bulles gazeuses.
• Test d’oxydase (Delarras, 2007)
Ce test permet une identification présomptive de certaines bactéries à Gram (-) qui produisent cette enzyme. En présence de cytochrome oxydase, le N,N,N’,N’-Tetramethyl-pphenylenediamine dihydrochloride (incolore) forme un composé coloré en bleu.
A l’aide de pinces placer un disque d’oxydase sur une lame porte objet, et humidifier à l’aide
d’une goutte d’eau physiologique stérile. Choisir une colonie bien isolée et représentative de
la culture fraiche à tester. Prélever la colonie choisie à l’aide d’une anse de platine. Frotter
doucement la colonie sur le disque. Un test positif se traduit par l’apparition d’une coloration
bleu foncée à violette dans un délai de 30 secondes, le test est négatif dans le cas contraire.
• Galerie API20E
Le système API20E (BioMérieux, Inc., France) est conçu pour l’identification des entérobactéries et autres bacilles à Gram négatif. Il se compose de 20 microtubes contenant des
substrats déshydratés, permettant une identification précise des bactéries ciblées. Les tests
sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait selon les recommandations du fournisseur (Figarella, 1998). Le mode opératoire est illustré dans la Fig.II.6.
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