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MATERIELS ET METHODES
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40 °C (bain-marie), les
ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy and
Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilic iq ue
(Si(OH)4) (Aminot and Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium
en milieu acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide
ascorbique en un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm. On y ajoute l’acide oxalique pour
éviter les interférences des phosphates.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser. Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en
utilisant les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes.
III.1.5.2 L’analyse de la chlorophylle
D’une manière générale, la mesure des pigments phytoplanctoniques est basée sur leurs
propriétés optiques : absorption de la lumière (spectrométrie) ou fluorescence (fluorimétrie). La
chlorophylle-a est un constituant intracellulaire, sa mesure nécessite la récupération des cellules
en suspension dans le milieu par filtration. Le matériel cellulaire récolté sur le filtre subi une
extraction par solvant. Les pigments chlorophylliens sont très sensibles à la lumière et au pH.
En milieu acide, la dégradation de la chlorophylle produit de la phéophytine-a (Rodier, 2009)
Pour nos échantillons, nous avons utilisé la méthode spectrophotométrie de type UV-1800.
Matériel et réactifs
Dispositif de filtration, Filtres en fibre de verre porosité de 0,45 μm (GF/F _ 47 mm), Tubes à
centrifuge en verre et centrifugeuse, Spectrophotomètre de type UV-1800 (CHIMQDZU)
équipé d’un double faisceau, Cuves en quartz, Acétone à 90 % , Eau déionisée, Acide
chlorhydrique concentré (0.3 mol/l), Suspension de carbonate de magnésium (mgCO3).
Méthode
L’échantillon homogénéisé est filtré puis le filtre est récupéré, plié et placé sur du papier
aluminium. Afin d’assurer une bonne conservation, on procède à l’ajout de quelques gouttes de
carbonate de magnésium qui prévient la dégradation de la chlorophylle et on stocke au
congélateur. Pour l’extraction, les filtres sont récupérés, mis dans des tubes à centrifuge puis
traités avec le solvant (l’acétone 90%) pendant 24h dans un réfrigérateur. L’extraction menée à
son terme, on procède à une centrifugation à 4000tr/min. Cette séparation nous permet d’obtenir
MATERIELS ET METHODES
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40 °C (bain-marie), les
ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy and
Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilic iq ue
(Si(OH)4) (Aminot and Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium
en milieu acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide
ascorbique en un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm. On y ajoute l’acide oxalique pour
éviter les interférences des phosphates.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser. Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en
utilisant les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes.
III.1.5.2 L’analyse de la chlorophylle
D’une manière générale, la mesure des pigments phytoplanctoniques est basée sur leurs
propriétés optiques : absorption de la lumière (spectrométrie) ou fluorescence (fluorimétrie). La
chlorophylle-a est un constituant intracellulaire, sa mesure nécessite la récupération des cellules
en suspension dans le milieu par filtration. Le matériel cellulaire récolté sur le filtre subi une
extraction par solvant. Les pigments chlorophylliens sont très sensibles à la lumière et au pH.
En milieu acide, la dégradation de la chlorophylle produit de la phéophytine-a (Rodier, 2009)
Pour nos échantillons, nous avons utilisé la méthode spectrophotométrie de type UV-1800.
Matériel et réactifs
Dispositif de filtration, Filtres en fibre de verre porosité de 0,45 μm (GF/F _ 47 mm), Tubes à
centrifuge en verre et centrifugeuse, Spectrophotomètre de type UV-1800 (CHIMQDZU)
équipé d’un double faisceau, Cuves en quartz, Acétone à 90 % , Eau déionisée, Acide
chlorhydrique concentré (0.3 mol/l), Suspension de carbonate de magnésium (mgCO3).
Méthode
L’échantillon homogénéisé est filtré puis le filtre est récupéré, plié et placé sur du papier
aluminium. Afin d’assurer une bonne conservation, on procède à l’ajout de quelques gouttes de
carbonate de magnésium qui prévient la dégradation de la chlorophylle et on stocke au
congélateur. Pour l’extraction, les filtres sont récupérés, mis dans des tubes à centrifuge puis
traités avec le solvant (l’acétone 90%) pendant 24h dans un réfrigérateur. L’extraction menée à
son terme, on procède à une centrifugation à 4000tr/min. Cette séparation nous permet d’obtenir