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II.2.2.1.3 Dosage des glucides (glycogène)
En 1951, Dubois a démontré après expérimentation, que le phénol en présence d'acide
sulfurique concentré peut être utilisé pour déterminer par colorimétrie des microquantités d'oses
et leurs dérivés, d'osides et de polyholosides présents dans l'eau de mer. Cette méthode est
simple, rapide et donne des résultats reproductibles. Les réactifs sont bon marché et stables. De
plus la coloration brune-orangée est relativement stable.
• Mode opératoire
− Peser 10 mg de la chair broyée et lyophilisée dans des tubes en verre (02 essais par
échantillon).
− Ajouter 03 mL de TCA 15% (en pesant 15 g d’Acide trichloracétique dans 100 mL
d’eau distillée). Dans les tubes contenant la chaire et on les laisse extraire 1h à 4 ° après
l’homogénéisation.
− Placer les tubes dans l’agitateur mécanique et les centrifuger à 2000 tr/min durant 10 min.
− Verser le contenu de chaque tube dans un flacon de 50mL.
− Pipeter 0,5 mL de surnageant et ajouter 04mL d’éthanol absolu, homogénéiser et
centrifuger 10min à 2000tr/min.
− Ajouter 0,5 mL de H2O après élimination de surnageant et homogénéiser par agitateur
mécanique.
• Préparation de la gamme étalonnage
On prépare une gamme de différentes concentration en glucose de 50µg /mL, 100µg/mL,
150µg /mL, 200 µg /mL ,400 µg/mL ,500 µg/mL. Réappliquer toutes les étapes précédentes.
(Voir annexe).
• Dosage
On ajoute 01 mL de phénol à 05% dans chaque tube et attendre 40 min. Puis 05 mL de H2SO4
et attendre 10 min.
Faire une lecture par le spectromètre 490nm après une homogénéisation.