Chapitre 2
37
Ces composés se condensent avec le phénol pour donner des complexes colorés (jaune-oronge).
L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des oses. La densité optique
est mesurée à 490 nm à l’aide d’un spectrophotomètre.
Mode opératoire
Préparation de la courbe d’étalonnage
Tableau 12: Dilution de la solution de glucose
Volume solution glucose en
ml
0.2
0.4
0.6
0.8
1
Volume eau distillée en ml
0.8
0.6
0.4
0.2
0
Concentration en mg/L
20
40
60
80
100
− Dans une série de tubes à essai, on met : à 1 ml des solutions glucose est rajouté 1 ml
de phénol (5%) suivi rapidement par l’addition de 5 ml d’acide sulfurique. Le tout est
mélangé au vortex.
− Les tubes sont incubés dans un bain marie à 100°C pendant 5 minutes puis refroidis à
la température ambiante et à l’obscurité pendant 30 min.
− La lecture à 490 nm est effectuée par spectrophotomètre.
Préparation des échantillons
− Dans une série de tubes à essai, sont mis 100 mg d’échantillon et 5 ml de H2SO4 0.5 M.
− Les tubes sont placés dans un bain marie à 100°C pendant 3 heures puis refroidis à
température ambiante.
− Les solutions sont neutralisées par l’addition des carbonates de sodium (solide) jusqu’à
arrêt de l’effervescence.
− Le volume est porté à 100 ml avec agitation.
− Un volume de 0.1 de chaque échantillon est prélevé dans un tube à essai, puis le volume
est complété à 1 ml par l’eau distillée
− Un volume de 1 ml de phénol (5%) est ajouté suivi rapidement par l’addition de 5 ml
d’acide sulfurique.