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Chapitre II
Matériel et méthodes
Milieux solides :
1. Dans environ 400 ml de d’H2O, ajouter les 9 premiers composants dans l'ordre indiqué
tout en agitant continuellement (tableau 3).
2. Porter le volume total à 500 ml avec de l'eau distillée.
3. Dans un récipient séparé, ajouter 15 g d'agar à 500 ml d'eau distillée.
4. Couvrir et stériliser les deux solutions dans l’autoclave (120°C, 20 min).
5. Dans un bain-marie, laisser les deux solutions refroidies à 45-50°C.
6. Ajouter le thiosulfate de sodium stérile (par autoclavage, composant 10) à la solution
d'agar et bien mélanger (tableauII.1)
7. Combiner les deux solutions d'agar et de liquide, bien mélanger. Noter que l'agar peut se
solidifier rapidement.
8. Laisser refroidir et conserver dans des boites des pétri à la température du réfrigérateur.
II.1.3.2. Méthodes d’isolement des microalgues
Deux méthodes d’isolement des microalgues ont été essayées afin de réussir l’opération et
d’obtenir un nombre important d’isolats. La première méthode est basée sur un ensemencement
direct des échantillons d’eaux, après une étape de dilution, sur milieuxBG11 solides. La
deuxième méthode repose sur un préenrichissement préalable dans un milieuBG11 liquide suivi
par étalement sur BG11 solides.
Méthode par étalement direct sur BG11 solide
Dans cette technique, des dilutions successives à partir de chaque échantillon d’eau ont été
préparées en ajoutant 1 ml de cultures aux tubes à essai contenant 9 ml de BG11 ou BG11-NaCl
liquides stériles sous bec bunsen, soit la dilution 10
-1 . Bien mélangé le tube à essai de la
première dilution avant de prendre 1 ml de ce tube et l’ajouter à 9 ml BG11, soit la dilution 10
-
2
. Répéter la procédure jusqu’à arriver à la dilution la faible souhaitée. Pour les échantillons de
la STEP de Chenoua, une visualisation microscopique d’une goutte d’échantillons
(agrandissement G40) n’a pas révélé la présence de microalgues ce qui nous a mené à limiter
la dilution à 10
-2
. Cependant, l’échantillon du bassin de la ferme marine a montré une abondance
Chapitre II
Matériel et méthodes
Milieux solides :
1. Dans environ 400 ml de d’H2O, ajouter les 9 premiers composants dans l'ordre indiqué
tout en agitant continuellement (tableau 3).
2. Porter le volume total à 500 ml avec de l'eau distillée.
3. Dans un récipient séparé, ajouter 15 g d'agar à 500 ml d'eau distillée.
4. Couvrir et stériliser les deux solutions dans l’autoclave (120°C, 20 min).
5. Dans un bain-marie, laisser les deux solutions refroidies à 45-50°C.
6. Ajouter le thiosulfate de sodium stérile (par autoclavage, composant 10) à la solution
d'agar et bien mélanger (tableauII.1)
7. Combiner les deux solutions d'agar et de liquide, bien mélanger. Noter que l'agar peut se
solidifier rapidement.
8. Laisser refroidir et conserver dans des boites des pétri à la température du réfrigérateur.
II.1.3.2. Méthodes d’isolement des microalgues
Deux méthodes d’isolement des microalgues ont été essayées afin de réussir l’opération et
d’obtenir un nombre important d’isolats. La première méthode est basée sur un ensemencement
direct des échantillons d’eaux, après une étape de dilution, sur milieuxBG11 solides. La
deuxième méthode repose sur un préenrichissement préalable dans un milieuBG11 liquide suivi
par étalement sur BG11 solides.
Méthode par étalement direct sur BG11 solide
Dans cette technique, des dilutions successives à partir de chaque échantillon d’eau ont été
préparées en ajoutant 1 ml de cultures aux tubes à essai contenant 9 ml de BG11 ou BG11-NaCl
liquides stériles sous bec bunsen, soit la dilution 10
-1 . Bien mélangé le tube à essai de la
première dilution avant de prendre 1 ml de ce tube et l’ajouter à 9 ml BG11, soit la dilution 10
-
2
. Répéter la procédure jusqu’à arriver à la dilution la faible souhaitée. Pour les échantillons de
la STEP de Chenoua, une visualisation microscopique d’une goutte d’échantillons
(agrandissement G40) n’a pas révélé la présence de microalgues ce qui nous a mené à limiter
la dilution à 10
-2
. Cependant, l’échantillon du bassin de la ferme marine a montré une abondance