Matériel et Méthodes
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II.9.2- L’application des souches pour l’élimination du chrome IV
Trois souches ont été retenues pour la suite du travail. Il s’agit de l’optimisation des
paramètres physico-chimiques et biologiques qui influencent l’éfficacité de
l’élimination du chrome IV à savoir : la concentration initiale du Chrome VI, la
quantité de l’inoculum et le pH du milieu.
II.9.2.1-Effet de la concentration initiale
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L et 200mg/ml à pH7
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
II.9.2.2-Effet de l’inoculum
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L et 200mg/L à pH7
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
9-2-3- Effet du pH
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L au pH5, pH7 et pH9
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
9-2-4- Dosage du Chrome
Les échantillons prélevés sont centrifugés pendant 10 min à 6000 rpm afin d’obtenir un
surnageant exempt de cellules microbiennes (Amrik et Anshu, 2013). 5ml d’échantillon ou
dilution ont été additionnés 4ml d’acide sulfurique 2N et 0,20 ml de la solution de diphénylcarbazyde (0.5% P/V). Après 10min de réaction, l’absorbance de la couleur révélée est
mesurée à 540nm.
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II.9.2- L’application des souches pour l’élimination du chrome IV
Trois souches ont été retenues pour la suite du travail. Il s’agit de l’optimisation des
paramètres physico-chimiques et biologiques qui influencent l’éfficacité de
l’élimination du chrome IV à savoir : la concentration initiale du Chrome VI, la
quantité de l’inoculum et le pH du milieu.
II.9.2.1-Effet de la concentration initiale
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L et 200mg/ml à pH7
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
II.9.2.2-Effet de l’inoculum
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L et 200mg/L à pH7
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
9-2-3- Effet du pH
Dans un volume de 150 ml de bouillon nutritif BHIB, une proportion de l’inoculum
jeune de 1%, 5% et 10% du volume total des souches à tester a été additionnée au
milieu contenant une concentration de Chrome VI de 100 mg/L au pH5, pH7 et pH9
ainsi qu’un témoin sans chrome. Le milieu est incubé à 37°C avec agitation modérée
pendant une durée de 120h. Des prélèvements de 10 ml sont réalisés dans le temps
(t0, t24, t46, t69 et t120), afin de suivre la croissance microbienne à 600nm et la
concentration du Chrome.
9-2-4- Dosage du Chrome
Les échantillons prélevés sont centrifugés pendant 10 min à 6000 rpm afin d’obtenir un
surnageant exempt de cellules microbiennes (Amrik et Anshu, 2013). 5ml d’échantillon ou
dilution ont été additionnés 4ml d’acide sulfurique 2N et 0,20 ml de la solution de diphénylcarbazyde (0.5% P/V). Après 10min de réaction, l’absorbance de la couleur révélée est
mesurée à 540nm.