Matériel et Méthodes
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Cette enzyme empêche l’accumulation d’H2O2 et le dégrade selon laréaction
suivante :
H 2O2 → H 2O +1/2 O2 (l’oxygène libéré se dégage sous forme gazeuse)
A l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée, ajouter l’inoculum bactérien et une goutte
d’eau oxygénée. Un Dégagement immédiat de bulles gazeuses traduit la présence de
la catalase.
II.7- Détermination du profil de résistance aux métaux lourds des souches
bactériennes isolées par la méthode de dilution en milieu gélosé
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées de métaux lourds à des
concentrations critiques : CuSO4 (400µg/ml) ; CdCl2(200 µg/ml) ; ZnSO4(400
µg/ml) ; HgCl2 (50 µg/ml) ;K2Cr2O7 (1600 µg/ml) ; PbNO3 (3200 µg/ml) puis
incuber à 37°C pendant 24h.
Une croissance bactérienne indique la résistance de cette souche à la concentration
des métaux lourds testés.
II.8-Détermination des résistances associées aux antibiotiques des souches
bactériennes isolées.
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées d’antibiotiques
à des
concentrations critiques : (AMX : 8µg/ml) ; (CTX : 2µg/ml) ; (CAZ : 8µg/ml) ;
(CIP : 0.5µg/ml) ; (Gen : 0.5µg/ml) et (RA : 16 µg/ml) puis incuber à 37°C pendant
24h.
La lecture est faite après 24h, une croissance bactérienne indique la résistance de
cette souche à l’antibiotique utilisé.
II.9-Essais d’élimination du chrome par des souches résistantes aux métaux
lourds (Serratiaodorefera,Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus)
II.9.1-Détermination du profil de résistance au chrome des souches
bactériennes isolées
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées chrome VI à des concentrations
finales de: 100µg/ml, 500µg/ml, 1000µg/ml et 5200µg/ml et incubé à 37°C pendant
24h.
Une croissance bactérienne indique la résistance de cette souche au chrome.
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Cette enzyme empêche l’accumulation d’H2O2 et le dégrade selon laréaction
suivante :
H 2O2 → H 2O +1/2 O2 (l’oxygène libéré se dégage sous forme gazeuse)
A l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée, ajouter l’inoculum bactérien et une goutte
d’eau oxygénée. Un Dégagement immédiat de bulles gazeuses traduit la présence de
la catalase.
II.7- Détermination du profil de résistance aux métaux lourds des souches
bactériennes isolées par la méthode de dilution en milieu gélosé
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées de métaux lourds à des
concentrations critiques : CuSO4 (400µg/ml) ; CdCl2(200 µg/ml) ; ZnSO4(400
µg/ml) ; HgCl2 (50 µg/ml) ;K2Cr2O7 (1600 µg/ml) ; PbNO3 (3200 µg/ml) puis
incuber à 37°C pendant 24h.
Une croissance bactérienne indique la résistance de cette souche à la concentration
des métaux lourds testés.
II.8-Détermination des résistances associées aux antibiotiques des souches
bactériennes isolées.
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées d’antibiotiques
à des
concentrations critiques : (AMX : 8µg/ml) ; (CTX : 2µg/ml) ; (CAZ : 8µg/ml) ;
(CIP : 0.5µg/ml) ; (Gen : 0.5µg/ml) et (RA : 16 µg/ml) puis incuber à 37°C pendant
24h.
La lecture est faite après 24h, une croissance bactérienne indique la résistance de
cette souche à l’antibiotique utilisé.
II.9-Essais d’élimination du chrome par des souches résistantes aux métaux
lourds (Serratiaodorefera,Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus)
II.9.1-Détermination du profil de résistance au chrome des souches
bactériennes isolées
Un inoculum de 2µl (dot) d’une culture jeune (10
8
cellule/ml) de la souche
bactérienne à tester obtenue sur BHIB après une incubation de 24hà 37°C, est
déposé à la surface de boites de MH additionnées chrome VI à des concentrations
finales de: 100µg/ml, 500µg/ml, 1000µg/ml et 5200µg/ml et incubé à 37°C pendant
24h.
Une croissance bactérienne indique la résistance de cette souche au chrome.