Matériels et méthodes
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3.5.7 Chlorophylle a :
Dans cette partie, nous allons estimer la concentration de la chlorophylle a en suivant la
méthode spectrophotométrique selon Aminot et Kérouel (2004).
3.5.7.1 Principe de la méthode :
La chlorophylle est un pigment indispensable à la photosynthèse des algues. Le dosage de ce
composé sert donc à estimer la biomasse phytoplanctonique du milieu marin. Cette mesure
repose sur leurs caractéristiques spectroscopiques (Absorption de la lumière) contenue dans les
cellules (Aminot et Kérouel, 2004). Le principe de base de la méthode est de mesurer
l'absorbance de la chlorophylle à une longueur d'onde spécifique dans un solvant approprié.
Voici les étapes clés du calcul de la chlorophylle.
3.5.7.2 Analyse au laboratoire :
L'analyse de la chlorophylle nécessite une protection contre la lumière permanente pendant
toutes les étapes du protocole analytique en raison de la sensibilité à la lumière de ces pigments.
• Filtration et extraction : l’eau de mer à été filtrer le jour même de la sortie en mer, les
échantillons de 2L sont filtrés sur des disques filtrants en fibres de verre (de type Wattman
GF/C, diamètre 47 mm) à l’aide d’une rampe à filtration sous vide, ensuite récupérer le
filtre avec 2 pincettes et l’introduire dans un tube remplit de 10ml d’acétone à 90 %,
couvrir le tube ,puis broyer délicatement le filtre à l’aide d’une tige en verre et conserver
dans le réfrigérateur à l’obscurité pendant 24 heures.
• Centrifugation : une fois l’extraction terminée, placer les tubes dans la centrifugeuse
pendant 5 minutes à 3000 tours/minutes puis les sortir de la centrifugeuse et essayer par
un léger mouvement de faire tomber les résidus de filtre collés aux parois du tube,
centrifuger à nouveau pendant 10 minutes à 3000 tours/minutes, transférer le surnageant
à l’aide d’une seringue dans une cuve de mesure spectrophotometrique en veillant à ne
pas prendre de filtre.
• Mesures des absorbances : sont faites à l’aide d’un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes suivantes : 665nm et 750nm avant et après acidification avec l’ajout de 10µl
d’acide chlorhydrique (0,3N).
La concentration de la chlorophylle a été calculée selon l’équation suivante :
[Chlorophylle a] (µg/l) = 27,7 (A na 665– A a 665) *(v/V.l)
V : volume d’eau filtrée (l).
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3.5.7 Chlorophylle a :
Dans cette partie, nous allons estimer la concentration de la chlorophylle a en suivant la
méthode spectrophotométrique selon Aminot et Kérouel (2004).
3.5.7.1 Principe de la méthode :
La chlorophylle est un pigment indispensable à la photosynthèse des algues. Le dosage de ce
composé sert donc à estimer la biomasse phytoplanctonique du milieu marin. Cette mesure
repose sur leurs caractéristiques spectroscopiques (Absorption de la lumière) contenue dans les
cellules (Aminot et Kérouel, 2004). Le principe de base de la méthode est de mesurer
l'absorbance de la chlorophylle à une longueur d'onde spécifique dans un solvant approprié.
Voici les étapes clés du calcul de la chlorophylle.
3.5.7.2 Analyse au laboratoire :
L'analyse de la chlorophylle nécessite une protection contre la lumière permanente pendant
toutes les étapes du protocole analytique en raison de la sensibilité à la lumière de ces pigments.
• Filtration et extraction : l’eau de mer à été filtrer le jour même de la sortie en mer, les
échantillons de 2L sont filtrés sur des disques filtrants en fibres de verre (de type Wattman
GF/C, diamètre 47 mm) à l’aide d’une rampe à filtration sous vide, ensuite récupérer le
filtre avec 2 pincettes et l’introduire dans un tube remplit de 10ml d’acétone à 90 %,
couvrir le tube ,puis broyer délicatement le filtre à l’aide d’une tige en verre et conserver
dans le réfrigérateur à l’obscurité pendant 24 heures.
• Centrifugation : une fois l’extraction terminée, placer les tubes dans la centrifugeuse
pendant 5 minutes à 3000 tours/minutes puis les sortir de la centrifugeuse et essayer par
un léger mouvement de faire tomber les résidus de filtre collés aux parois du tube,
centrifuger à nouveau pendant 10 minutes à 3000 tours/minutes, transférer le surnageant
à l’aide d’une seringue dans une cuve de mesure spectrophotometrique en veillant à ne
pas prendre de filtre.
• Mesures des absorbances : sont faites à l’aide d’un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes suivantes : 665nm et 750nm avant et après acidification avec l’ajout de 10µl
d’acide chlorhydrique (0,3N).
La concentration de la chlorophylle a été calculée selon l’équation suivante :
[Chlorophylle a] (µg/l) = 27,7 (A na 665– A a 665) *(v/V.l)
V : volume d’eau filtrée (l).