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Caryotype : classement des chromosomes selon leur nombre, taille,
forme, position du centromère et position de bandes de coloration .
Un caryotype permet de détecter d'éventuelles anomalies dans le non1bre
de chromosome, leur structure ( aneuploïdies : monosomies, polysomies,
délétions, fusions chromosomiques ... ) pour expliquer un phénotype
malade ou en période prénatale lorsque le risque d'aberration chromosomique est trop élevée chez un enfant à naître (future mère de plus de 38
ans, anomalie chromosomique parentale connue ... ).
La technique FISH ou « hybridation in situ fluorescente » ne nécessite
pas de culture cellulaire et s'applique directement aux cellules interphasiques ou métaphasiques contenues dans un frottis cellulaire. Elle permet
également d'effectuer l'étude chromosomique des spermatozoïdes et de
rechercher les anomalies éventuelles avant une fécondation in vitro.
TECHNIQUE CLASSIQUE DU CARYOTYPE
Culture de cellules
Ajout de colchicine :
Choc osmotique ménagé
in vitro en présence ...i blocage des cellules•••~ (éclatement des cellules)
d'un stimulant mitotique
en métaP-hase
en milieu hypotonique : dispersion
des chromosomes métaphasiques
Analyse du caryotype :
Observation,
Nombre de chromosomes
photographie :
Taille ~~classement des
Position des bandes
chromosomes
Position centromère
Coloration (Giemsa)
des chromosomes :
apparition de bandes sombres
et claires sur les chromosomes
TECHNIQUE FISH (Hybridation ln Situ en Fluorescence)
DJllOIU1 ADN (double brin) de cellules
en métaphase ou en interphase
Dénaturation (chaleur : 42 °C formamide) ...fAdditio~ d'un.e . s.onde (ADN) 71},.,. ~ J..LU_LW..U.. ~ ADN simple brin
marquee spec1f1que
• Hybridation
Ch
~
romosome
Adddition d'anticorps marqués 1
u u_Jîor,
r .rom observé
par un fluorochrome F
~ ~L'>...
Zone~
Fixation des Ac sur la sonde marquée
Jtl:J1 JI \ j / marquees
u 1 1 1
1
f{(fl~orescentes)
Observation au microscope à fluorescence des zones fluorescentes et prise d'image
Les deux principales techniques d'étude des chromosomes