276 Réactions de reconnaissance d’oligosaccharides importantes dans le monde vivant
17.6.2 Sélectines E
La sélectine E n’est pas exprimée sur les cellules vasculaires endothéliales c au
repos ». Elle apparaît de façon transitoire lorsque l’agression des tissus en leur
voisinage entraîne la sécrétion d’une cytokine, polypeptide actif, qui stimule sa
biosynthèse. Les endotoxines bactériennes produisent le même effet. Par contre,
la sélectine E serait exprimée de façon permanente dans l’arthrite rhumastismale.
La cellule activée accroche (ou freine) un leucocyte par association de ses molécules de sélectine E avec un oligosaccharide complémentaire présent à la surface
du leucocyte. On peut aussi activer les cellules endothéliales en culture avec la
cytokine. Ceci a permi le clonage de la sélectine E et, finalement, son expression
de façon stable dans un autre type de cellules en culture, les cellules CHO
(Chinese Hamster Ovary). Cette lignée, CHO-E sera l’outil de recherche pour
découvrir le ligand oligosaccharidique complémentaire.
La méthode logique consisterait à séparer et isoler tous les oligosaccharides de
la paroi leucocytaire et à les tester séparément. C’est rigoureusement impratiquable. I1 s’agira donc de deviner intelligemment les meilleurs candidats parmi les
sources naturelles accessibles. Une méthode consiste à faire adsorber une quantité connue du produit à tester par les parois d’une cuvette en plastique, à recouvrir
avec une suspension de cellules CHO-E, éventuellement marquées au tritium, et
à doser la radioactivité persistante après lavage. Cette méthode se prête à des
déterminations semi-quantitatives. Quoi qu’il en soit, il faut multiplier les essais,
donc les tests doivent être faciles et rapides. La méthode des << néoglycolipides N
se prête bien à cette exploration. Cette méthode part de l’observation des propriétés analytiques remarquables des glycolipides : ils se séparent très bien les uns des
autres par chromatographie sur couche mince de gel de silice. €1 se prêtent bien à
l’analyse de structure par spectrométrie de masse (voir le paragraphe 10.5.1).
C’est pourquoi, si les ligands à tester ne sont pas déjà des glycolipides, mais des
oligosaccharides obtenus par synthèse ou par dégradation de glycoprotéines, on
les convertit d’abord en analogues de glycolipides, les néoglycolipides. Pour cela
on les combine au dipalmitoyle de phosphatidyléthanolamine 17.26 par amination
réductrice.
CH,OCOC ,5H31
I
CHOCOC15H3
I
CH,OPO (OH) CH,CH,NH,
17.26
Ceci suppose que I’oligosaccharide a sa fonction aldhéhyde potentielle intacte
à l’extrémité terminale réductrice. Si ce n’est pas le cas, lorsque l’oligosaccharide a été obtenu par p-élimination alcaline réductrice, il faut faire apparaître une
fonction aldhéyde par oxydation périodique (au détriment de l’intégrité de l’oli-
17.6.2 Sélectines E
La sélectine E n’est pas exprimée sur les cellules vasculaires endothéliales c au
repos ». Elle apparaît de façon transitoire lorsque l’agression des tissus en leur
voisinage entraîne la sécrétion d’une cytokine, polypeptide actif, qui stimule sa
biosynthèse. Les endotoxines bactériennes produisent le même effet. Par contre,
la sélectine E serait exprimée de façon permanente dans l’arthrite rhumastismale.
La cellule activée accroche (ou freine) un leucocyte par association de ses molécules de sélectine E avec un oligosaccharide complémentaire présent à la surface
du leucocyte. On peut aussi activer les cellules endothéliales en culture avec la
cytokine. Ceci a permi le clonage de la sélectine E et, finalement, son expression
de façon stable dans un autre type de cellules en culture, les cellules CHO
(Chinese Hamster Ovary). Cette lignée, CHO-E sera l’outil de recherche pour
découvrir le ligand oligosaccharidique complémentaire.
La méthode logique consisterait à séparer et isoler tous les oligosaccharides de
la paroi leucocytaire et à les tester séparément. C’est rigoureusement impratiquable. I1 s’agira donc de deviner intelligemment les meilleurs candidats parmi les
sources naturelles accessibles. Une méthode consiste à faire adsorber une quantité connue du produit à tester par les parois d’une cuvette en plastique, à recouvrir
avec une suspension de cellules CHO-E, éventuellement marquées au tritium, et
à doser la radioactivité persistante après lavage. Cette méthode se prête à des
déterminations semi-quantitatives. Quoi qu’il en soit, il faut multiplier les essais,
donc les tests doivent être faciles et rapides. La méthode des << néoglycolipides N
se prête bien à cette exploration. Cette méthode part de l’observation des propriétés analytiques remarquables des glycolipides : ils se séparent très bien les uns des
autres par chromatographie sur couche mince de gel de silice. €1 se prêtent bien à
l’analyse de structure par spectrométrie de masse (voir le paragraphe 10.5.1).
C’est pourquoi, si les ligands à tester ne sont pas déjà des glycolipides, mais des
oligosaccharides obtenus par synthèse ou par dégradation de glycoprotéines, on
les convertit d’abord en analogues de glycolipides, les néoglycolipides. Pour cela
on les combine au dipalmitoyle de phosphatidyléthanolamine 17.26 par amination
réductrice.
CH,OCOC ,5H31
I
CHOCOC15H3
I
CH,OPO (OH) CH,CH,NH,
17.26
Ceci suppose que I’oligosaccharide a sa fonction aldhéhyde potentielle intacte
à l’extrémité terminale réductrice. Si ce n’est pas le cas, lorsque l’oligosaccharide a été obtenu par p-élimination alcaline réductrice, il faut faire apparaître une
fonction aldhéyde par oxydation périodique (au détriment de l’intégrité de l’oli-