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Configuration des monosaccharides
Figure 1.3 Séparation d’anomères par HPLC à
4”C, éluant : eau-acétonitrile (20:80 v/v).
Ordonnées : absorption à 280 nm. Pour les autres
D-glucose
P-P
fi
D-galactose
I
I
I
I
conditions, voir le texte. Adapté d’après
50
40
30
20
10
0
S. Honda, S. Suzuki et K. Kakehi,
Minutes
J. ChrornatogE, 291 (1984) 317-325.
disperses, dont la dimension varie de 3 à 15 p, dans des colonnes cylindriques
analytiques de 10 à 15 cm. On utilise aussi des colonnes préparatives de dimensions 2,5 x 30 cm. L‘écoulement n’est possible que sous des pressions variant de
une à 300 atmosphères, et la durée de l’opération est de l’ordre de l’heure. On
dose les sucres dans l’effluant par mesure des variations de conductance, d’indice de réfraction ou d’absorption ultra-violette. Ceci impose une extrême stabilité
de toutes les conditions opératoires, si bien que la colonne est entourée d’éléments
de régulation particulièrement dispendieux.
Entre autres phases stationnaires adaptées à ces séparations, on a décrit l’emploi de polystyrène-divinylbenzène sulfoné en sphères de diamètre strictement
contrôlé (6 p), qui remplissent une colonne de dimensions 6 x 150 mm. Cette résine échangeur de cations est employée sous la forme Ca++. Le débit est 0,s mL/mn.
Dans ces e~périences[~], les auteurs ont dosé les sucres dans l’effluant par conversion en un dérivé absorbant à 280 nm, mais cela ne serait sans doute pas nécessaire avec un matériel plus moderne. La figure 1.3 donne les enregistrements
obtenus avec le D-glucose, le D-galactose et le D-mann~se[~].
Les furanoses a et fi s’équilibrent trop rapidement pour qu’on puisse les séparer à 0-4”C, mais on a pu réaliser cette séparation entre -25 et -4S0, avec des solvants spéciaux, sur le D-galactose et le fucose.
1.3.4 Dichroïsme circulaire
On a fait appel aux mesures de dichroïsme circulaire pour << voir )) les tautomères carbonylés, particulièrement évanescents. Les composés carbonylés présentent une absorption vers 280 nm due à la transition nx* de la double liaison
C = O. Le départ de cette bande est visible sur les solutions aqueuses de sucres,
mais en raison de sa faible intensité, elle est largement masquée par un épaulement d’une bande beaucoup plus intense. Pour cette raison, on ne peut pas mesurer directement une extinction. Mais ce qui est caractéristique, c’est l’existence
Configuration des monosaccharides
Figure 1.3 Séparation d’anomères par HPLC à
4”C, éluant : eau-acétonitrile (20:80 v/v).
Ordonnées : absorption à 280 nm. Pour les autres
D-glucose
P-P
fi
D-galactose
I
I
I
I
conditions, voir le texte. Adapté d’après
50
40
30
20
10
0
S. Honda, S. Suzuki et K. Kakehi,
Minutes
J. ChrornatogE, 291 (1984) 317-325.
disperses, dont la dimension varie de 3 à 15 p, dans des colonnes cylindriques
analytiques de 10 à 15 cm. On utilise aussi des colonnes préparatives de dimensions 2,5 x 30 cm. L‘écoulement n’est possible que sous des pressions variant de
une à 300 atmosphères, et la durée de l’opération est de l’ordre de l’heure. On
dose les sucres dans l’effluant par mesure des variations de conductance, d’indice de réfraction ou d’absorption ultra-violette. Ceci impose une extrême stabilité
de toutes les conditions opératoires, si bien que la colonne est entourée d’éléments
de régulation particulièrement dispendieux.
Entre autres phases stationnaires adaptées à ces séparations, on a décrit l’emploi de polystyrène-divinylbenzène sulfoné en sphères de diamètre strictement
contrôlé (6 p), qui remplissent une colonne de dimensions 6 x 150 mm. Cette résine échangeur de cations est employée sous la forme Ca++. Le débit est 0,s mL/mn.
Dans ces e~périences[~], les auteurs ont dosé les sucres dans l’effluant par conversion en un dérivé absorbant à 280 nm, mais cela ne serait sans doute pas nécessaire avec un matériel plus moderne. La figure 1.3 donne les enregistrements
obtenus avec le D-glucose, le D-galactose et le D-mann~se[~].
Les furanoses a et fi s’équilibrent trop rapidement pour qu’on puisse les séparer à 0-4”C, mais on a pu réaliser cette séparation entre -25 et -4S0, avec des solvants spéciaux, sur le D-galactose et le fucose.
1.3.4 Dichroïsme circulaire
On a fait appel aux mesures de dichroïsme circulaire pour << voir )) les tautomères carbonylés, particulièrement évanescents. Les composés carbonylés présentent une absorption vers 280 nm due à la transition nx* de la double liaison
C = O. Le départ de cette bande est visible sur les solutions aqueuses de sucres,
mais en raison de sa faible intensité, elle est largement masquée par un épaulement d’une bande beaucoup plus intense. Pour cette raison, on ne peut pas mesurer directement une extinction. Mais ce qui est caractéristique, c’est l’existence