Détermination des séquences par les méthodes spectroscopiques
153
b) Les protons H-2 et H-3 du mannose
c) Les protons H-3 des acides sialiques
d) Le proton H-5 et le méthyle du fucose
e) Les protons H-3 et H-4 du galactose
f) Le méthyle des groupements N-acétyle des sucres aminés et de l’acide siaDans les cas les plus favorables, la valeur de 6 dépend du type de résidu, de sa
configuration anomérique, du site de glycosidation, de la séquence des sucres
composants et de la position du résidu dans la séquence. On a récemment[l0I ajouté à cette liste les protons NH des groupements -NHCOCH,. Naturellement, ils ne
sont pas visibles dans le solvant D,O ni dans l’eau ordinaire aux pH > 7. On les
observe facilement dans H,O, à 27”C, pH 5,2. Lorsqu’un signal NH a été identifié, on peut repérer les signaux de certains protons voisins du même résidu monosaccharidique par effet Overhauser : le méthyle de CH,CONH et le proton anomérique sur un résidu 2-acétamido-2-déoxy pyranose, les protons H-3 sur un
sialoside.
Pour utiliser ces données spectroscopiques, on se sert d’un certain nombre de
règles empiriques, établies sur des oligosaccharides simples de structure parfaitement bien connue par ailleurs. Ainsi la glycosidation d’un résidu dans un oligosaccharide entraîne de petits déplacements des signaux indicateurs de ce résidu,
parfois également perceptibles dans les résidus voisins, de l’ordre de
0,02 - 0,25 p.p.m. L‘emploi de ces règles à des déterminations de structures inconnues suppose qu’il y a additivité et qu’il n’y a pas de changement important de
conformation, qui perturberait fortement le diamagnétisme local. Elles sont donc
les plus sûres dans les séries formées de blocs analogues. Pour que le lecteur puisse apprécier ceci, nous allons donner un extrait d’une analyse de ce type des
chaînes oligosaccharides de la thyro-globuline
C’est la glycoprotéine
la plus importante de la glande thyroïde. La chaîne glucidique, liée à l’acide aspartique, est séparée par hydrolyse catalysée par l’enzyme peptide-N4 - (N-acetyl-0glucosaminyl) asparagine amidase F, d’origine bactérienne (Flavobacterium
meningosepticum), et le mélange d’oligosaccharides est fractionné sur colonne.
Parmi les produits isolés, nous retiendrons la collection schématisée sur la figure
9.7. Le terme le plus simple est le nonasaccharide 9.12, où manquent les résidus
encadrés et le sulfate. On repère les signaux indicateurs de ce nonasaccharide, et
l’on observe que le signal de H(2) du résidu Man-4’est noyé dans la masse. I1 y a
aussi dans la collection un décasaccharide avec un résidu GlcNAc supplémentaire. Dans ce composé, le signal de H-2 de Man-4’sort de la masse et apparaît à 6
4,109, ce qui indique que le nouveau résidu GlcNAc est en 2 du mannose Man4’. Les signaux indicateurs confirment sa position terminale, celle du cadre 5’.
L‘addition du résidu D-Gal donne un undécasaccharide. On en connaissait déjà un
proche analogue[9]. La position de ce résidu est confirmée comme celle du cadre
6’par un déplacement de +28 mpm du signal de H-1 de GlcNAc - 5’. Le terme
suivant de la collection est un dodécasaccharide. I1 contient en plus un résidu Gal,
lique
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b) Les protons H-2 et H-3 du mannose
c) Les protons H-3 des acides sialiques
d) Le proton H-5 et le méthyle du fucose
e) Les protons H-3 et H-4 du galactose
f) Le méthyle des groupements N-acétyle des sucres aminés et de l’acide siaDans les cas les plus favorables, la valeur de 6 dépend du type de résidu, de sa
configuration anomérique, du site de glycosidation, de la séquence des sucres
composants et de la position du résidu dans la séquence. On a récemment[l0I ajouté à cette liste les protons NH des groupements -NHCOCH,. Naturellement, ils ne
sont pas visibles dans le solvant D,O ni dans l’eau ordinaire aux pH > 7. On les
observe facilement dans H,O, à 27”C, pH 5,2. Lorsqu’un signal NH a été identifié, on peut repérer les signaux de certains protons voisins du même résidu monosaccharidique par effet Overhauser : le méthyle de CH,CONH et le proton anomérique sur un résidu 2-acétamido-2-déoxy pyranose, les protons H-3 sur un
sialoside.
Pour utiliser ces données spectroscopiques, on se sert d’un certain nombre de
règles empiriques, établies sur des oligosaccharides simples de structure parfaitement bien connue par ailleurs. Ainsi la glycosidation d’un résidu dans un oligosaccharide entraîne de petits déplacements des signaux indicateurs de ce résidu,
parfois également perceptibles dans les résidus voisins, de l’ordre de
0,02 - 0,25 p.p.m. L‘emploi de ces règles à des déterminations de structures inconnues suppose qu’il y a additivité et qu’il n’y a pas de changement important de
conformation, qui perturberait fortement le diamagnétisme local. Elles sont donc
les plus sûres dans les séries formées de blocs analogues. Pour que le lecteur puisse apprécier ceci, nous allons donner un extrait d’une analyse de ce type des
chaînes oligosaccharides de la thyro-globuline
C’est la glycoprotéine
la plus importante de la glande thyroïde. La chaîne glucidique, liée à l’acide aspartique, est séparée par hydrolyse catalysée par l’enzyme peptide-N4 - (N-acetyl-0glucosaminyl) asparagine amidase F, d’origine bactérienne (Flavobacterium
meningosepticum), et le mélange d’oligosaccharides est fractionné sur colonne.
Parmi les produits isolés, nous retiendrons la collection schématisée sur la figure
9.7. Le terme le plus simple est le nonasaccharide 9.12, où manquent les résidus
encadrés et le sulfate. On repère les signaux indicateurs de ce nonasaccharide, et
l’on observe que le signal de H(2) du résidu Man-4’est noyé dans la masse. I1 y a
aussi dans la collection un décasaccharide avec un résidu GlcNAc supplémentaire. Dans ce composé, le signal de H-2 de Man-4’sort de la masse et apparaît à 6
4,109, ce qui indique que le nouveau résidu GlcNAc est en 2 du mannose Man4’. Les signaux indicateurs confirment sa position terminale, celle du cadre 5’.
L‘addition du résidu D-Gal donne un undécasaccharide. On en connaissait déjà un
proche analogue[9]. La position de ce résidu est confirmée comme celle du cadre
6’par un déplacement de +28 mpm du signal de H-1 de GlcNAc - 5’. Le terme
suivant de la collection est un dodécasaccharide. I1 contient en plus un résidu Gal,
lique