CYTOPLASME ET ORGANITES CYTOPLASMIQUES
preuve de leur présence sur le vivant; en effet, l’étude de la biréfringence des
mitochondries dans des jeunes cellules germinales mâles de l’escargot montre
que ces organites renferment un matériel orienté parallèlement à leur grand axe;
ce matériel orienté correspond certainement aux crêtes longitudinales que l’on
observe au microscope électronique. Remarquons également que les divers
procédés de fixation révèlent toujours la même ultrastructure mitochondriale,
ce qui constitue une bonne confirmation des observations.
Quant aux particules qui sont attachées à la membrane interne, et que seule la
coloration négative met bien en évidence, on sait que le matériel qui les constitue
possède des propriétés biochimiques particulières (voir plus loin, p. 121) mais
rien n'a prouvé jusqu’alors que ce matériel se présente effectivement sous cet
aspect dans les mitochondries vivantes.
6.2.1. ETUDE IN SITU
Constitution chimique 6.2.
Les réactions cytochimiques faites in situ montrent que les mitochondries renferment des lipides et des protéines dont certaines sont des enzymes : déshydrogénases
et oxydases en particulier. La coloration des mitochondries par le vert Janus
in vivo est due à la présence d'oxydases qui maintiennent le colorant sous sa
forme oxydée, alors que dans le reste de la cellule il est réduit en un composé
incolore.
En outre, les études spectrophotométriques révèlent la présence de cytochromes
(voir plus loin, p. 110) dans les mitochondries vivantes.
6.2.2. ISOLEMENT DE FRACTIONS ET DE SOUS-FRACTIONS «MITOCHONDRIES»
Les premiers isolements de fractions mitochondriales ont été effectués par Claude
(1940), puis la technique a été perfectionnée par Hogeboom, Schneider et Palade
(1948), qui ont utilisé comme milieu d'isolement du saccharose 0,88 M.
L'examen au microscope électronique de coupes de culots mitochondriaux
permet de vérifier la pureté des fractions obtenues (fig. 64).
En faisant agir sur des fractions pures de mitochondries des tensio-actifs ou des ultrasons, il est possible de briser ces organites. Après rupture des membranes, la matrice se
dilue dans le milieu d’isolement et une nouvelle centrifugation sépare un culot de membranes, tandis que la matrice diluée reste dans le surnageant.
En traitant les culots de membranes remis en suspension par les ultra-sons, on détache
des membranes des grains de 85 Â de diamètre environ, qui correspondent sans doute
aux particules élémentaires attachées à la membrane interne.
6.2.3. ANALYSE CHIMIQUE
Les résultats de l'analyse globale de mitochondries isolées se résument ainsi :
Eau
Protéines
Lipides
Nucléotides
Ions
66 %
22 %
11 %
[ 1 %
108
preuve de leur présence sur le vivant; en effet, l’étude de la biréfringence des
mitochondries dans des jeunes cellules germinales mâles de l’escargot montre
que ces organites renferment un matériel orienté parallèlement à leur grand axe;
ce matériel orienté correspond certainement aux crêtes longitudinales que l’on
observe au microscope électronique. Remarquons également que les divers
procédés de fixation révèlent toujours la même ultrastructure mitochondriale,
ce qui constitue une bonne confirmation des observations.
Quant aux particules qui sont attachées à la membrane interne, et que seule la
coloration négative met bien en évidence, on sait que le matériel qui les constitue
possède des propriétés biochimiques particulières (voir plus loin, p. 121) mais
rien n'a prouvé jusqu’alors que ce matériel se présente effectivement sous cet
aspect dans les mitochondries vivantes.
6.2.1. ETUDE IN SITU
Constitution chimique 6.2.
Les réactions cytochimiques faites in situ montrent que les mitochondries renferment des lipides et des protéines dont certaines sont des enzymes : déshydrogénases
et oxydases en particulier. La coloration des mitochondries par le vert Janus
in vivo est due à la présence d'oxydases qui maintiennent le colorant sous sa
forme oxydée, alors que dans le reste de la cellule il est réduit en un composé
incolore.
En outre, les études spectrophotométriques révèlent la présence de cytochromes
(voir plus loin, p. 110) dans les mitochondries vivantes.
6.2.2. ISOLEMENT DE FRACTIONS ET DE SOUS-FRACTIONS «MITOCHONDRIES»
Les premiers isolements de fractions mitochondriales ont été effectués par Claude
(1940), puis la technique a été perfectionnée par Hogeboom, Schneider et Palade
(1948), qui ont utilisé comme milieu d'isolement du saccharose 0,88 M.
L'examen au microscope électronique de coupes de culots mitochondriaux
permet de vérifier la pureté des fractions obtenues (fig. 64).
En faisant agir sur des fractions pures de mitochondries des tensio-actifs ou des ultrasons, il est possible de briser ces organites. Après rupture des membranes, la matrice se
dilue dans le milieu d’isolement et une nouvelle centrifugation sépare un culot de membranes, tandis que la matrice diluée reste dans le surnageant.
En traitant les culots de membranes remis en suspension par les ultra-sons, on détache
des membranes des grains de 85 Â de diamètre environ, qui correspondent sans doute
aux particules élémentaires attachées à la membrane interne.
6.2.3. ANALYSE CHIMIQUE
Les résultats de l'analyse globale de mitochondries isolées se résument ainsi :
Eau
Protéines
Lipides
Nucléotides
Ions
66 %
22 %
11 %
[ 1 %
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