POLLUANTS ORGANIQUES
• Eliminer éventuellement les traces d’eaux résiduelles du concentrât par
addition de sulfate de sodium anhydre dans le ballon de l’évaporateur.
• Transférer l’extrait déshydraté dans un tube gradué de 15 ml (en opérant lentement le sulfate de sodium reste au fond du ballon).
• Rincer le ballon de l’évaporateur avec 3 à 4 ml de solvant propre que
l'on ajoute à l’extrait dans le tube de 15 ml.
• Evaporer à sec l’extrait organique, dans le tube de 15 ml, sous jet d’air
ou d'azote purifié.
• Reprendre par 5,0 ml d’hexane : cette solution est prête pour l’analyse
par fluorescence.
Dans certaines zones de forte productivité biologique ou dans certains
estuaires, il est nécessaire de purifier l’extrait par chromatographie d’adsorption sur Florisil (§ 7.2), avant de procéder à l’analyse.
7.1.2. Organismes marins
Les échantillons de tissus (§ 3.4) sont au préalable déshydratés par lyophilisation ou par passage à l’étuve (60 à 80 °C).
• Peser précisément un poids P de tissus secs (en général de l’ordre de 10 g).
• Extraire les tissus par un mélange comprenant 80 % d’hexane et 20 %
d'acétone en volumes :
— soit à chaud à l’aide d’un Soxhlet, en continu pendant 24 h,
soit à froid à l’aide d’un homogénéiseur de type virtis par trois extractions successives, de 10 min chacune, avec 100 ml, puis deux fois 50 ml de
solvant.
• Centrifuger les extraits (pour éliminer les matières particulaires) et les
rassembler.
• Concentrer à l’évaporateur rotatif puis évaporer à sec sous jet d’air ou
d’azote purifié.
• Reprendre l'extrait sec par 2 ml d’hexane : cet extrait, qui contient les
hydrocarbures et les substances organiques co-extraites, doit être purifié
dans les conditions décrites au paragraphe 7.2 ci-dessous.
7.2. PURIFICATION
La phase de purification est réalisée par chromatographie d’adsorption
sur Florisil, pour se débarrasser des substances organiques co-extraites,
notamment les lipides extraits des organismes marins.
• Placer dans la colonne de chromatographie (§ 5) un tampon de laine de
verre propre, puis 3 g de Florisil (§ 6.3). Une nouvelle colonne est préparée pour chaque échantillon. *
• Laver le Florisil par 20 ml au moins d’hexane que l’on éliminera.
• Introduire les 2 ml de l’extrait non purifié dans la colonne.
• Eluer les hydrocarbures par les volumes d’hexane suivants :
pour l'eau de mer, 30 ml sont recueillis en bas de colonne et concentrés à 5 ml (évaporateur rotatif et jet d’air ou d’azote),
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• Eliminer éventuellement les traces d’eaux résiduelles du concentrât par
addition de sulfate de sodium anhydre dans le ballon de l’évaporateur.
• Transférer l’extrait déshydraté dans un tube gradué de 15 ml (en opérant lentement le sulfate de sodium reste au fond du ballon).
• Rincer le ballon de l’évaporateur avec 3 à 4 ml de solvant propre que
l'on ajoute à l’extrait dans le tube de 15 ml.
• Evaporer à sec l’extrait organique, dans le tube de 15 ml, sous jet d’air
ou d'azote purifié.
• Reprendre par 5,0 ml d’hexane : cette solution est prête pour l’analyse
par fluorescence.
Dans certaines zones de forte productivité biologique ou dans certains
estuaires, il est nécessaire de purifier l’extrait par chromatographie d’adsorption sur Florisil (§ 7.2), avant de procéder à l’analyse.
7.1.2. Organismes marins
Les échantillons de tissus (§ 3.4) sont au préalable déshydratés par lyophilisation ou par passage à l’étuve (60 à 80 °C).
• Peser précisément un poids P de tissus secs (en général de l’ordre de 10 g).
• Extraire les tissus par un mélange comprenant 80 % d’hexane et 20 %
d'acétone en volumes :
— soit à chaud à l’aide d’un Soxhlet, en continu pendant 24 h,
soit à froid à l’aide d’un homogénéiseur de type virtis par trois extractions successives, de 10 min chacune, avec 100 ml, puis deux fois 50 ml de
solvant.
• Centrifuger les extraits (pour éliminer les matières particulaires) et les
rassembler.
• Concentrer à l’évaporateur rotatif puis évaporer à sec sous jet d’air ou
d’azote purifié.
• Reprendre l'extrait sec par 2 ml d’hexane : cet extrait, qui contient les
hydrocarbures et les substances organiques co-extraites, doit être purifié
dans les conditions décrites au paragraphe 7.2 ci-dessous.
7.2. PURIFICATION
La phase de purification est réalisée par chromatographie d’adsorption
sur Florisil, pour se débarrasser des substances organiques co-extraites,
notamment les lipides extraits des organismes marins.
• Placer dans la colonne de chromatographie (§ 5) un tampon de laine de
verre propre, puis 3 g de Florisil (§ 6.3). Une nouvelle colonne est préparée pour chaque échantillon. *
• Laver le Florisil par 20 ml au moins d’hexane que l’on éliminera.
• Introduire les 2 ml de l’extrait non purifié dans la colonne.
• Eluer les hydrocarbures par les volumes d’hexane suivants :
pour l'eau de mer, 30 ml sont recueillis en bas de colonne et concentrés à 5 ml (évaporateur rotatif et jet d’air ou d’azote),
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