MATÉRIEL PARTICULAIRE
7.3.3. Méthode de Lorenzen (solvant : acétone à 90 %)
• Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve du spectrophotomètre ; on évite l’entraînement de fibres de verre en aspirant lentement l’extrait à l’aide, par exemple, d’une seringue de verre.
• Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
• Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs
d’onde de 665 et 750 nm, soit
et
La mesure à 750 nm doit
rester inférieure à 0,005 par centimètre de trajet optique.
• Acidifier par addition de 10 pl d’acide chlorhydrique 0,3 mol.l"1 par
millilitre d’extrait (soit une goutte pour environ 5 ml) directement dans
la cuve et attendre 2 à 3 min.
• Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm.
soit T/f665 et ^èa 750.
7.3.4. Méthode de Lorenzen modifiée (solvant : méthanol)
• Procéder comme au paragraphe 7.3.3 y compris la mesure des absorbances avant acidification ; puis, au lieu d’acidifier dans la cuve, opérer
comme suit.
• Transférer la totalité de l’extrait de la cuve dans un petit bêcher.
• Acidifier par addition de 10 pl d’acide chlorhydrique 0,3 mol.I"1 par
millilitre d’extrait, mélanger, attendre 2 à 3 min.
• Neutraliser par addition de 25 mg de carbonate de magnésium en poudre
par millilitre d'extrait et agiter lentement pendant 10 min.
• Centrifuger, ou filtrer, l’extrait pour éliminer l’excès de MgCO3.
• Transférer à nouveau l’extrait dans la cuve de mesure et positionner la cuve
dans le spectrophotomètre.
• Mesurer les absorbances à 665 et 750 nm, soit ^^65 et
7.3.5. Méthode trichromatique
• Transférer l'extrait et positionner rigoureusement la cuve comme décrit
au paragraphe 7.3.3.
• Mesurer les absorbances aux longueurs d’onde préconisées (§ 7.3.1) :
630, 645 (ou 647), 663 (ou 664) et 750 nm. Noter ces valeurs avec la plus
grande précision (+ 0,001) en particulier pour les absorbances inférieures
-7çn S0' - ^?630.' ^.645’ etc- ces absorbances brutes. L’absorbance à
750~ nm doit être inférieure à 0,005 par centimètre de trajet optique.
*
8. ( Al.CL LS, EXPRESSION DES RÉSULTATS
8.1. MÉTHODE DE LORENZEN
t
a^or^a, nces ^rutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doient are corriges en soustrayant les blancs des cuves (§ 7.3.2); puis on
188
7.3.3. Méthode de Lorenzen (solvant : acétone à 90 %)
• Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve du spectrophotomètre ; on évite l’entraînement de fibres de verre en aspirant lentement l’extrait à l’aide, par exemple, d’une seringue de verre.
• Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
• Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs
d’onde de 665 et 750 nm, soit
et
La mesure à 750 nm doit
rester inférieure à 0,005 par centimètre de trajet optique.
• Acidifier par addition de 10 pl d’acide chlorhydrique 0,3 mol.l"1 par
millilitre d’extrait (soit une goutte pour environ 5 ml) directement dans
la cuve et attendre 2 à 3 min.
• Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm.
soit T/f665 et ^èa 750.
7.3.4. Méthode de Lorenzen modifiée (solvant : méthanol)
• Procéder comme au paragraphe 7.3.3 y compris la mesure des absorbances avant acidification ; puis, au lieu d’acidifier dans la cuve, opérer
comme suit.
• Transférer la totalité de l’extrait de la cuve dans un petit bêcher.
• Acidifier par addition de 10 pl d’acide chlorhydrique 0,3 mol.I"1 par
millilitre d’extrait, mélanger, attendre 2 à 3 min.
• Neutraliser par addition de 25 mg de carbonate de magnésium en poudre
par millilitre d'extrait et agiter lentement pendant 10 min.
• Centrifuger, ou filtrer, l’extrait pour éliminer l’excès de MgCO3.
• Transférer à nouveau l’extrait dans la cuve de mesure et positionner la cuve
dans le spectrophotomètre.
• Mesurer les absorbances à 665 et 750 nm, soit ^^65 et
7.3.5. Méthode trichromatique
• Transférer l'extrait et positionner rigoureusement la cuve comme décrit
au paragraphe 7.3.3.
• Mesurer les absorbances aux longueurs d’onde préconisées (§ 7.3.1) :
630, 645 (ou 647), 663 (ou 664) et 750 nm. Noter ces valeurs avec la plus
grande précision (+ 0,001) en particulier pour les absorbances inférieures
-7çn S0' - ^?630.' ^.645’ etc- ces absorbances brutes. L’absorbance à
750~ nm doit être inférieure à 0,005 par centimètre de trajet optique.
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8. ( Al.CL LS, EXPRESSION DES RÉSULTATS
8.1. MÉTHODE DE LORENZEN
t
a^or^a, nces ^rutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doient are corriges en soustrayant les blancs des cuves (§ 7.3.2); puis on
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