Méthodes de travail en microbiologie
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tube ou en boîte de Petri (avec ou sans traitement préalable au bain-marie à 80 °C
en fonction de la norme utilisée) {cf. deuxième partie, chapitre 4 « Clostridium »,
paragraphes 4.3.1 et 4.3.2.).
Des applications de cette technique sont données dans le tableau 31.
Tableau 31 ■ Applications de la technique de dénombrement en anaérobiose.
Recherche et dénombrement de...
Normes
Bactéries sulfito-réductrices en conditions
anaérobies dans les aliments
Norme NF ISO 15213 (2003) [méthode en
tubes profonds (cf. également supra, tableau
27A pour la méthode en boîtes de Petri)]
Norme XP V 08-061 (2005) (méthode de
routine à 46 °C)
Spores de bactéries anaérobies sulfito-réductrices et de Clostridia sulfitoréducteurs dans
les eaux destinées à la consommation
humaine, les eaux minérales naturelles, les
eaux de sources et les eaux thermales
Norme NF T 90-415 (1985)
Clostridium perfringens en microbiologie des
aliments à 37 °C avec confirmation biochimique
ou à 46 °C sans confirmation biochimique
Norme NF EN ISO 7937 (2005) (technique
par comptage des colonies en boîtes de Petri)
3.2.2.6. Technique de dénombrement par épifluorescence
Cette technique de dénombrement comporte une phase de préparation des bactéries contenues dans l’échantillon, avec leur mise en présence avec un substrat
de viabilité contenant un précurseur de la fluorescéine ; elle est suivie d’une
phase d’observation au microscope à épifluorescence. Les bactéries viables, vert
fluorescent, peuvent être alors dénombrées.
► Application
Dénombrement de micro-organismes dans des eaux minérales naturelles
(Soule et al., 2001 ; Delarras et Trébaol, 2003).
4.
Techniques d’observation des bactéries
| 4.1. Examen macroscopique des bactéries
□
Pour les examens macroscopiques de bactéries communes, aérobies strictes et
| anaérobies facultatives, les souches bactériennes doivent être cultivées sur un
« milieu gélosé solide en boîte de Petri et dans un milieu liquide en tube, afin de
? déterminer les caractères culturaux de ces bactéries.
i
c 4.1.1. Culture dans un milieu liquide
3
•
• en bouillon trypcase soja
î
Cf. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel et des
milieux de culture », paragraphe 4.1.1.1.
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tube ou en boîte de Petri (avec ou sans traitement préalable au bain-marie à 80 °C
en fonction de la norme utilisée) {cf. deuxième partie, chapitre 4 « Clostridium »,
paragraphes 4.3.1 et 4.3.2.).
Des applications de cette technique sont données dans le tableau 31.
Tableau 31 ■ Applications de la technique de dénombrement en anaérobiose.
Recherche et dénombrement de...
Normes
Bactéries sulfito-réductrices en conditions
anaérobies dans les aliments
Norme NF ISO 15213 (2003) [méthode en
tubes profonds (cf. également supra, tableau
27A pour la méthode en boîtes de Petri)]
Norme XP V 08-061 (2005) (méthode de
routine à 46 °C)
Spores de bactéries anaérobies sulfito-réductrices et de Clostridia sulfitoréducteurs dans
les eaux destinées à la consommation
humaine, les eaux minérales naturelles, les
eaux de sources et les eaux thermales
Norme NF T 90-415 (1985)
Clostridium perfringens en microbiologie des
aliments à 37 °C avec confirmation biochimique
ou à 46 °C sans confirmation biochimique
Norme NF EN ISO 7937 (2005) (technique
par comptage des colonies en boîtes de Petri)
3.2.2.6. Technique de dénombrement par épifluorescence
Cette technique de dénombrement comporte une phase de préparation des bactéries contenues dans l’échantillon, avec leur mise en présence avec un substrat
de viabilité contenant un précurseur de la fluorescéine ; elle est suivie d’une
phase d’observation au microscope à épifluorescence. Les bactéries viables, vert
fluorescent, peuvent être alors dénombrées.
► Application
Dénombrement de micro-organismes dans des eaux minérales naturelles
(Soule et al., 2001 ; Delarras et Trébaol, 2003).
4.
Techniques d’observation des bactéries
| 4.1. Examen macroscopique des bactéries
□
Pour les examens macroscopiques de bactéries communes, aérobies strictes et
| anaérobies facultatives, les souches bactériennes doivent être cultivées sur un
« milieu gélosé solide en boîte de Petri et dans un milieu liquide en tube, afin de
? déterminer les caractères culturaux de ces bactéries.
i
c 4.1.1. Culture dans un milieu liquide
3
•
• en bouillon trypcase soja
î
Cf. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel et des
milieux de culture », paragraphe 4.1.1.1.